牛乳房炎におけるケモカインCCL28の発現機序と役割の解明

阐明趋化因子CCL28在牛乳腺炎中的表达机制和作用

• 批准号: 22K15001
• 负责人: 長澤 裕哉
• 金额: $ 2.91万
• 依托单位: National Agriculture and Food Research Organization
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15001/
• 关键词: 牛; 乳房炎; ケモカイン; 傷害抑制

ケモカインCCL28は、抗菌ペプチドの領域を持つため、CCL28が細菌に直接作用して乳腺上皮細胞の傷害抑制、ひいては細菌感染後の乳房炎の症状の緩和・治癒に寄与している可能性が考えられる。本年度は、CCL28が持つ乳房炎原因菌に対する抗菌作用および乳房内細菌感染を想定した乳腺上皮細胞株（BMEC）におけるCCL28の合成と分泌機序について明らかとすることを目的とした。まず、牛の組換え型CCL28を大腸菌発現系において作製し、黄色ブドウ球菌（Staphylococcus aureus：SA）とTris-HClおよびスキムミルク中で混合し、1時間処理したSAを回収し、血液寒天培地で平板培養し、生菌数を測定した。Tris-HCl中でCCL28をSAに添加した結果、濃度依存的にSAの生存率が減少した。また、スキムミルク中においても抗菌活性を示した。以上より、乳汁中の細菌感染後のCCL28は乳房炎の症状緩和に寄与している可能性がある。次に、BMECへSA死菌を添加し、経時的に培地および細胞を回収し、CCL28の発現量をELISAやWestern blot解析により測定した。BMECへSA死菌を添加した結果、添加したSA死菌の濃度依存的に培地中にCCL28が検出され細胞内においても時間依存的にCCL28の発現が上昇した。よって、CCL28はSA死菌の刺激によりBMEC中で合成・分泌されることが示された。

ケモカインCCL28は, antibacterial ペプチドの区をつため, CCL28がbacteria directly act on the mammary gland epithelium Inhibition of damage to cells, alleviation of symptoms of mastitis after bacterial infection, and consideration of the possibility of cure. This year, CCL28 maintains the bacterial infection that causes mastitis and has antibacterial effects in the breast. Leather cell line (BMEC), the synthesis and secretion mechanism of CCL28 is the same as the sequence of synthesis and secretion.まず, cow type CCL28 coliform coliforms produced by において, yellow Staphylococcus aureus: SA), Tris-HCl mixing in the sterilizer, recovery of SA after 1-time treatment, plate culture of blood cold soil, and determination of bacterial count. The addition of CCL28 SA to Tris-HCl resulted in a concentration-dependent decrease in the survival rate of SA. The antibacterial activity of また, スキムミルク中においてもshows した. As mentioned above, the possibility of alleviating symptoms of mastitis after CCL28 infection with bacteria in breast milk is not related to the possibility. Secondary, BMEC and SA dead bacteria were added, and the cultured cells were recovered and CCL28 was measured in ELISA and Western blot analysis. The result of adding dead bacteria to BMEC is the concentration-dependent increase of CCL28 in the cells and the increase of CCL28 in the cells in a time-dependent manner.よって, CCL28 is synthesized and secreted in BMECs stimulated by dead bacteria.