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Functional analysis of bioactive ingredients from Miso

味噌生物活性成分的功能分析

基本信息

批准号：
19J14971
负责人：
中村文彬
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Waseda University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-25 至 2021-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

味噌からエピゲノムを指標とした生理活性成分の探索により、抗ストレス活性成分フェルラ酸エチルエステル（FAEE）を明らかにしたが、本成分の作用メカニズムは知られていない。低分子化合物の作用メカニズム解明へのアプローチは様々あるが、エピゲノム調節は酵素だけでなく、様々な補酵素や補因子など数多くの制御因子によって巧妙に制御されているため、FAEEによる直接の標的分子を同定することはメカニズムを理解する上で重要となる。そこで本研究では、FAEEの標的分子および標的遺伝子領域を明らかにすることでFAEEの作用メカニズムの解明を目指している。本年度はマウスES細胞から分化誘導した神経幹細胞からのFAEE標的分子候補の探索を行った。令和一年度に合成したFAEEのプローブ分子を用いて、標的分子のプルダウン実験を行った結果、FAEE結合ビーズに特異的なバンドが複数得られた。バンドについてはLC-MS/MSによるアミノ酸配列解析によって候補タンパク質を明らかにしており、現在、その標的分子候補をターゲットとしたshRNAベクターを作製およびノックダウン細胞におけるフェノタイプを確認している。また、FAEEの神経分化誘導作用機構を遺伝子発現変化の面から推察するため、FAEEで処理した神経幹細胞からcDNAの調製を行い、RNA-seqを用いた網羅的遺伝子発現解析を行った。FAEE処理によりcontrolと比べて転写量が1.5倍以上に上昇もしくは低下したタンパク質をコードしている遺伝子がそれぞれ24ずつ得られた。また、転写量が2倍以上に変化した114のノンコーディングRNAを得た。これらの遺伝子について、real-time PCRによる遺伝子発現量の確認を行うとともに、神経分化誘導作用との関係性を検証している。

Miso is the active ingredient of Miso. The active ingredient of Miso is FAEE. The role of low molecular weight compounds in the regulation of enzyme components, enzyme complement factors, multiple regulatory factors, clever control of FAEE, direct target molecule identity, and understanding of FAEE is important. This study aims to clarify the role of FAEE in molecular and genetic domains. This year, we will explore the molecular candidates for FAEE target by inducing differentiation of ES cells In this paper, the author analyzes the application of FAEE in the field of molecular biology, and analyzes the application of FAEE in the field of molecular biology. LC-MS/MS is a candidate for the determination of acid sequence, and the target molecule candidate is a candidate for the determination of acid sequence. The mechanism of FAEE differentiation inducing gene expression is analyzed by gene expression in FAEE processing, cDNA modulation and RNA-seq. The control and comparison write volume for FAEE processing has increased by more than 1.5 times, but the quality of the data has been reduced for 24 seconds. The amount of DNA is more than twice that of DNA. The identification of gene expression by real-time PCR, induction of neural differentiation, and correlation