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ウシにおける多能性幹細胞の生殖系列細胞への分化誘導に関する研究

牛多能干细胞诱导分化为生殖细胞的研究

基本信息

批准号：
19J20197
负责人：
林将文
金额：
$ 1.98万
依托单位：
Kyushu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-25 至 2022-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

精子や卵子を含む生殖細胞は次世代に遺伝情報やエピジェネティック情報を伝えることができる唯一の細胞系列であり、始原生殖細胞(PGC)を起源としている。多能性幹細胞からPGCを誘導し、それらから機能的な精子あるいは卵子を作出することが可能となれば、多能性幹細胞から次世代の個体形成が期待される。本研究では、ウシを含む大型哺乳類において多能性幹細胞からPGCを誘導することを目的としている。一般的にiPS細胞は株間差が大きく、品質の低いものが多く存在することが知られている。そこで、大型哺乳類の中で安定したES細胞が樹立されているミナミシロサイのES細胞を用いてPGCの誘導方法を確立し、他種へ応用することを目指す。これまでにミナミシロサイのES細胞から樹立したレポーターES細胞を用いて、ミナミシロサイPGC様細胞を誘導することに成功していた。本年度は、誘導されたミナミシロサイPGC様細胞を分離できる細胞表面マーカーの組合わせを同定し、レポーター非依存的にミナミシロサイPGC様細胞を精製することに成功した。また、ミナミシロサイPGC様細胞をさらに分化させるため、マウスで報告されているPGC様細胞の卵子への誘導方法を用いてミナミシロサイPGC様細胞をマウスの生殖巣体細胞と共培養を行った。しかし、マウス生殖巣体細胞はミナミシロサイPGC様細胞を支持できず、共培養開始から数日以内にミナミシロサイPGC様細胞は消失してしまうことがわかった。そこで別の方法としてm220フィーダー上でのミナミシロサイPGC様細胞の培養を確立することによってミナミシロサイPGC様細胞をさらに分化させることを目指した。培地や添加物を検討した結果、ミナミシロサイPGC様細胞を維持および増殖させることに成功した。一方で、後期PGCマーカーの発現は観察されなかったため、本方法をさらに改良していく必要がある。

The sperm egg contains the reproductive cell of the next generation and the origin of the primordial reproductive cell (PGC). The pluripotent cells and the spermatozoa of the pluripotent cells, the sperm and the eggs of the pluripotent cells may be affected, and the next generation of the pluripotent cells are formed to form an expectant cell. The purpose of this study is to determine whether the purpose of this study is due to the fact that the multipotent cells of large mammals, such as the multipotent cell PGC, are involved in this study. In general, there is a large difference in the number of iPS cells and a large number of low-grade plants. In general and large-scale mammals, ES cells are required to make sure that the ES cells are registered by using the PGC guidance method, and that other types of cells are used to make sure that the target is checked. Please tell me that the ES cell is correct and that the ES cell is correct. The PGC cell guide is successful. This year, the PGC cells were separated from each other. The cell surface cells were separated from each other. The cells were not dependent on each other. The results showed that they were not dependent on each other. The results showed that they were successful. The PGC cells were differentiated from each other in order to differentiate the cells. The report reported that the eggs were co-cultured with the reproductive body cells in the same way that the PGC cells were co-cultured. The cells of the reproductive organs of the mother, the This is the first time to make sure that the PGC cells are properly located. The PGC cells are divided into different cells. The results of the experiment were compared with the results of the experiment, and the results were successful when the PGC cells were maintained. In the future, PGC will find that it is necessary to improve the quality of this method.