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筋ジストロフィー症の新規治療法としての霊長類胚性幹細胞由来筋細胞の移植応用

灵长类胚胎干细胞来源的肌肉细胞移植作为肌营养不良症新疗法的应用

基本信息

批准号：
20659238
负责人：
鈴木登
金额：
$ 2.05万
依托单位：
St.Marianna University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

デュシェンヌ型筋ジストロフィー症は呼吸筋・骨格筋の障害をもたらし患者のQOLは低下し且つ生命予後も不良である。我々はこれら筋疾患に対する根治療法として幹細胞から筋細胞を分化誘導し、これを用いた移植治療の研究を行なっている。筋ジストロフィー症モデルであるmdxマウスの筋細胞は異常ジストロフィン遺伝子のためジストロフィン蛋白を持たないが、ES細胞由来筋細胞と融合して正常にジストロフィン蛋白を発現する筋線維を形成した。近年、ES細胞の持つ倫理的制約を回避できる誘導多能性幹細胞(iPS)細胞が樹立された。そこでiPS細胞にも同様に遺伝子導入で筋細胞を分化誘導可能であるかを検討した。より強いIGFII産生をもたらすため、CAG promoterの下流にIGFII遺伝子をサブクローニングしたpCAG-IGFIIを作成した。電気穿孔法にて上記プラスミドをiPS細胞に導入しG418耐性の安定した形質転換細胞(IGFII遺伝子を導入した細胞;IGFII細胞)を回収した。しかしこの細胞は過剰な細胞増殖を行い、腫瘍形成能を示したため、その後の検討は中止した。そこでiPS細胞を遺伝子組み換え可溶性IGFIIと共に21日間培養して筋細胞分化を誘導した。この細胞はIGFII受容体、骨格筋特異的蛋白であるMyoD、myogenin、MRF4、myf5、dystrophin mRNAを発現し、dystrophin蛋白も発現した。この成績はiPS細胞をIGFIIとともに培養することで、腫瘍化していない筋細胞を分化誘導できることを示している。今後、mdxマウスへのiPS細胞由来筋細胞の移植も行いその有用性を評価する。

デュシェンヌ type steel ジストロフィー disease は respiratory muscle, skeletal muscle の handicap of をもたらしの QOL in patients with low はし and つ life to bad もである. I 々はこれら muscle disorders にす seaborne る curatie treatment として stem cells からを muscle cell differentiation induced し, これを with いた transplantation のを line なっている. Jin ジストロフィー disease モデルである MDX マウスの abnormal muscle cells はジストロフィン heritage 伝 son のためジストロフィン protein を hold たないが, ES cells origin reinforcement と fusion して normal にジストロフィン protein を発 now する reinforcement form し d をた. In recent years, ES cells have been restricted by <s:1> ethical constraints を to avoid でるるる to induce pluripotent stem cell (iPS) cells が to establish された. そこで iPS cells にも with others に posthumous son 伝 import をで muscle cell differentiation induced may であるかを beg し検た. Strong よりい IGFII produce をもたらすため, the CAG promoter の obscene に IGFII heritage 伝 son をサブクローニングした pCAG - IGFII を made した. 気 perforation method にて written プラスミドを iPS cells に import し G418 patience の settle した form quality planning in cells (IGFII posthumous son 伝を import した cells; IGFII) を back 収した. The <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> <s:1> cells pass through the な cell proliferation を perform the を, the formation of abscesses を show that the たため and そ are followed by the 検 which stops the た. そこで iPS cells を heritage 伝 subgroups み in soluble IGFII えとに total 21 cultivate しをて muscle cell differentiation induced した. The <s:1> IGFII receptors of the <s:1> strain cells, the specific proteins of bone and tendons であるMyoD, myogenin, MRF4, myf5, dystrophin mRNAを are released を, and the dystrophin protein <s:1> is released た. この grades は iPS cells を IGFII とともに cultivate することで, swollen sores change していなをい muscle cell differentiation induced できることを shown している. In the future, mdx ウスへ <s:1> iPS cells will be used to evaluate the usefulness of tendon cell <s:1> transplantation <e:1>, <s:1> そ <e:1> and を価する.