自然宿主コウモリにおけるレオウイルスの特異的な複製制御機構の解明

阐明呼肠孤病毒在其天然宿主蝙蝠中的特定复制控制机制

• 批准号: 19J21852
• 负责人: 納田 遼太郎
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2019
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2019-04-25 至 2022-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19J21852/
• 关键词: コウモリ; 自然宿主; Pteropine orthoreovirus; Nelson Bay orthoreovirus; ウイルス複製制御; レオウイルス; 複製制御; 機能の解明; 特異的

1. Pteropine orthoreovirus（PRV）p17と相互作用する宿主因子の探索PRVはオーストラリアやアジアのコウモリから分離されることから、その自然宿主はコウモリであると考えられている。これまでの研究によって、PRV非構造タンパク質p17は、PRV FASTの細胞融合活性をコウモリ細胞特異的に制御することで、ウイルス複製を調節できる因子であることが明らかになっている。またp17がコウモリ細胞特異的に機能することから、コウモリ細胞由来の宿主因子と相互作用することが示唆されている。昨年度の解析ではp17発現細胞におけるトランスクリプトーム解析（RNA-seq）や共免疫沈降法を用いてp17と相互作用する因子の探索を行った。これらの解析によって複数の宿主因子候補が得られた。本年度はそれぞれの候補因子の発現を抑制（ノックダウン）するsmall hairpin RNA（shRNA）を設計し、各種宿主因子がp17の機能に与える影響について調べた。通常、コウモリ細胞にFASTを単独で発現させた場合、p17による活性化を受けないため細胞融合は起こらない。しかしながら一部のshRNAをあらかじめ導入したコウモリ細胞ではp17非存在下でもFASTの細胞融合活性が有意に上昇した。現在、このようなターゲット因子が2つ同定されている。また、これらの因子はp17との共免疫沈降によって得られたものであり、p17と直接的もしくは間接的に結合することが示唆された。以上の結果より、p17はこれらの宿主因子と結合し、その機能を阻害することでFASTを活性化していることが推測される。コウモリの遺伝子配列やトランスクリプトーム、プロテオームの情報は十分ではないため、詳細な解析にはコウモリ細胞の基礎データを蓄積することも重要である。今後は、これらの因子の機能解析を進めることで、p17のコウモリ細胞特異的な機能の全体像が明らかになることが期待される。

1. Pteropine orthoreovirus (PRV) p17 interaction with host factors PRV is a natural host. In this study, PRV non-structural protein p17 and PRV FAST cell fusion activity were studied to determine the cell-specific regulatory factors involved in the regulation of cell replication. p17 is a cell specific function that is expressed in host factors and cell origin. Analysis of p17-expressing cells by RNA-seq and exploration of p17-interacting factors by immuno-sedimentation The host factor candidate for this analysis is obtained. This year, we have been working to suppress the expression of candidate factors such as small hairpin RNA (shRNA), the function of p17 and the influence of host factors. Usually, when FAST is discovered in Ukolai cells alone, cell fusion occurs when p17 is activated. Some shRNAs were introduced into the cells and the fusion activity of FAST cells was increased intentionally in the absence of p17. Now, the factor of 2 is the same as the factor of 2. P17 is the most important factor in the immune system. These results suggest that p17 may inhibit the binding of host factors and inhibit the activation of FAST. The information on the distribution, distribution, and distribution of DNA is very important. Detailed analysis is important for the accumulation of DNA in DNA. In the future, the functional analysis of these factors will be further developed, and the whole picture of cell-specific functions of p17 will be revealed.

项目成果

ロタウイルスNSP3タンパク質のeIF4G結合領域変異がウイルス複製に及ぼす影響

轮状病毒NSP3蛋白eIF4G结合区突变对病毒复制的影响

• 发表时间: 2019
• 作者: 納田遼太郎;金井祐太;川岸崇裕;Pannacha Pimfhun;小林剛
• 通讯作者: 小林剛

ロタウイルスベクターの開発

轮状病毒载体的开发

• 发表时间: 2019
• 作者: 金井祐太;川岸崇裕;Pannacha Pimfhun ;納田遼太郎;大西未沙;Nurdin Jeffry;野村圭一郎;Tina Luciany;山﨑萌子;小林剛
• 通讯作者: 小林剛

Reverse Genetics Approach for Developing Rotavirus Vaccine Candidates Carrying VP4 and VP7 Genes Cloned from Clinical Isolates of Human Rotavirus

• DOI: 10.1128/jvi.01374-20
• 发表时间: 2021-01-01
• 期刊: JOURNAL OF VIROLOGY
• 影响因子: 5.4
• 作者: Kanai, Yuta;Onishi, Misa;Kobayashi, Takeshi
• 通讯作者: Kobayashi, Takeshi

Development of an entirely plasmid-based reverse genetics system for 12-segmented double-stranded RNA viruses

• DOI: 10.1073/pnas.2105334118
• 发表时间: 2021-10-19
• 期刊: PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF THE UNITED STATES OF AMERICA
• 影响因子: 11.1
• 作者: Nouda, Ryotaro;Minami, Shohei;Kobayashi, Takeshi
• 通讯作者: Kobayashi, Takeshi

Generation of recombinant rotaviruses encoding a split NanoLuc peptide tag

编码分割 NanoLuc 肽标签的重组轮状病毒的产生

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2020.11.007
• 发表时间: 2021
• 期刊: Biochemical and Biophysical Research Communications
• 影响因子: 3.1
• 作者: Pimfhun P; Kanai Y;Kawagishi T;Nouda R;Nurdin J;Yamasaki M;Nomura K;Tina L;Kobayashi T
• 通讯作者: Kobayashi T