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Elucidation of the mechanism underlying osteoclastic differentiation and functional regulation by ligand-independent GPCR activation

通过不依赖配体的 GPCR 激活阐明破骨细胞分化和功能调节的机制

基本信息

批准号：
19K05954
负责人：
石橋宰
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Osaka Metropolitan University (2022)Osaka Prefecture University (2019-2021)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2019
资助国家：
日本
起止时间：
2019-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

申請者らは、リガンド未同定のG蛋白質受容体共役型受容体（GPCR）であるGPR137Bの発現が破骨細胞の分化に伴い顕著に亢進することを見出した。さらに、本遺伝子が欠損した破骨前駆細胞を用いて、GPR137Bが破骨細胞分化に決定的な役割を担うことを明らかにした。一方、Ursoら（Bone 127, 104-113, 2019）は、Gpr137b遺伝子の欠損により, マウス骨髄細胞の破骨細胞分化能, およびゼブラフィッシュにおける骨吸収活性が亢進することを報告している。この際、リガンド非依存的なGPR137Bの恒常活性が破骨細胞分化に関わることが示唆された。そこで本研究は、破骨細胞分化におけるGPR137Bを介したシグナル伝達の詳細について解析することを目的とする。本年度は、前年度に引き続き①GPR137Bを過剰発現するRAW264細胞株の作出と破骨細胞分化能の評価、および、②Gpr137b遺伝子欠損マウスの骨髄細胞を用いた破骨細胞分化能評価を行った。その結果、①では、Gpr137b過剰発現レンチウィルスベクターを用いて、Gpr137b過剰発現細胞クローンとコントロール細胞クローンをそれぞれ合計5株ずつ取得することに成功した。そこで、これらの細胞クローンのRANKL依存性破骨細胞分化能について、酒石酸耐性酸フォスファターゼ（TRAP）染色や、各種破骨細胞マーカー遺伝子（カテプシンＫ、TRAP等）の発現解析により評価した。また、②では、筑波大学トランスボーダー医学研究センターとの共同研究にて作製したGpr137b遺伝子欠損マウスから定法に従い骨髄細胞を分離後、破骨細胞分化誘導因子であるReceptor activator of nuclear factor-kappa B ligand (RANKL)存在下で培養し、破骨細胞分化能を評価した。

The applicant has shown that GPR 137B can be developed into osteoclast differentiation and hyperstimulation by varying G protein receptor co-active receptor (GPCR). GPR 137B is the key factor for osteoclast differentiation. A party, Urso (Bone 127, 104-113, 2019), Gpr 137b gene damage, osteoclast differentiation ability of bone marrow cells, bone resorption activity increase, report. The constant activity of GPR137B, which is independent of osteoclast differentiation, is related to osteoclast differentiation. The aim of this study was to analyze the expression of GPR137B in osteoclast differentiation. This year, compared with the previous year, GPR 137B cells were detected in RAW264 cell line and evaluated for osteoclast differentiation ability. GPR 137B cells were detected in RAW264 cell line and evaluated for osteoclast differentiation ability in RAW 264 cell line. Results: ① Gpr 137b over-detection cells and Gpr 137b over-detection cells were successfully detected. RANKL-dependent osteoclast differentiation can be evaluated by staining with TRAP, tartrate-resistant acid, and analysis of the development of various osteoclast genes (TRAP, TRAP, etc.) The osteoclast differentiation ability was evaluated after osteoclast cells were isolated and cultured in the presence of Receptor activator of nuclear factor-kappa B ligand (RANKL).