Strukturelle Grundlagen und katalytische Funktion der Domänenbewegung der 5'-Nukleotidase

5-核苷酸酶结构域移动的结构基础和催化功能

• 批准号: 35735968
• 负责人: Professor Dr. Norbert Sträter
• 金额: --
• 依托单位: Institut für Bioanalytische Chemie
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 2005-12-31 至 2009-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/35735968?language=en
• 关键词: Strukturelle; Grundlagen; und; katalytische; Funktion

Die Funktionsweise vieler Proteine hängt entscheidend von einer kontrollierten Änderung ihrer Raumstruktur ab. In Enzymen ist häufig eine Drehbewegung zweier Bereiche (Domänen) für die Katalyse notwendig. Trotz der fundamentalen Bedeutung dieser Bewegungen ist das Verhältnis zwischen Proteinstruktur, der Natur und Dynamik der Konformationsänderung und schließlich der Enzymkatalyse wenig verstanden. In dem vorliegenden Projekt werden diese Zusammenhänge anhand des Enzyms 5'-Nukleotidase (5'-NT) mit molekularbiologischen, biochemischen, spektroskopischen, kristallographischen und rechnergestützen Methoden untersucht. Die Struktur der 5'-NT wurde von uns in verschiedenen Kristallformen untersucht. Durch den Vergleich der verschiedenen Proteinkonformere zeigte sich, dass das Enzym eine neuartige und ungewöhnliche Art von Domänenrotation zeigt. In dem beantragten Projekt soll analysiert werden, inwieweit die Domänenrotation die katalytische Funktion des Enzyms ist beeinflusst. Weiterhin sollen die strukturellen Eigenschaften charakterisiert werden, die den Konformationswechsel ermöglichen und steuern. Dazu werden Varianten präpariert, die Mutationen in der Scharnierregion und der Domänengrenzfläche aufweisen sowie Mutanten, die in der geschlossenen Konformation getrappt sind. Durch spektroskopische Untersuchungen (NMR, Fluoreszenz und EPR) sollen das Gleichgewicht und möglichst die Geschwindigkeitskonstante der Konformationsänderung bestimmt werden. So soll u.a. geklärt werden, ob die Domänenbewegung auch in Abwesenheit des Substrates (oder von Inhibitoren) stattfindet oder ob die Schließbewegung erst durch die Substratbindung induziert wird.

他说：“我的工作是让你的工作变得更好。在Enzymen ist häufigeine Drehbewegung Zweier Bereiche(Domänen)für die Katalyse notwendig.从根本上讲，这是一种新的技术和技术，从根本上讲，就是从根本上解决问题。在DEM Vorliegenden Projekt中，有Zusammenhänge和5‘-Nucleotdase(5’-NT)MIT分子生物学、生物化学、光谱、结晶和重建方法。他说：“这是一种特殊的形式。”这是一种新的艺术形式，也是一种新技术。在DEM中，我们对这项工程进行了分析，并对其进行了分析。他说：“我们不能改变自己的性格，也不能改变自己的信息。”Dazu是Varianten Präpariert，Domänengrenzfläche aufweisen Sowie Mutanten，死于Geschlossenen Konform Getrappt Sind。从核磁共振、荧光和电子顺磁共振(核磁共振、荧光和电子顺磁共振)中，我们发现了一种新的估计方法--Geschwindigkeitskonstante。因此，只有我们在底物(或抑制物质)的基础上，才能找到更多的底物。