イネ種子の細胞内物質貯蔵における小胞体機能タンパク質の機能解明とその育種的利用

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1、プロラミンの小胞体内への蓄積機構解明esp3 変異は複数のCysR（cysteine rich）プロラミン分子を欠失する。Mutmap法によってESP3候補遺伝子として検出した遺伝子について、サンガー法によって当該候補遺伝子のゲノム塩基配列を解析した。その結果、esp3変異体において当該遺伝子にSNPは認められなかった。そこで、再度MutMap法による連鎖解析を行うためにesp3系統と野生型との交雑F2個体の自殖種子を用いて野生型とesp3ホモF2個体をそれぞれ約30個体選抜した。2、グルテリン前駆体の小胞体からの小胞輸送機構解明グルテリン前駆体を多量に蓄積する突然変異であるGlup1及びglup7の原因遺伝子同定のために、MutMap法を用いて両遺伝子の染色体上の位置を推定した。MutMap法による連鎖解析の結果、Glup1及びglup7において、遺伝子候補領域内に膜交通に関与する因子と輸送小胞の構成因子のそれぞれをコードする遺伝子にSNPが認められた。3、小胞体タンパク質と澱粉合成代謝制御との関連性解明プロラミン分子種の蓄積が変化したesp1、esp3、Esp4変異種子及びグルテリン前駆体を多量に集積するesp2変異種子における澱粉合成関連酵素を解析した。登熟種子から抽出したタンパク質を用いてNative-PAGEによるSS、BE、DBEの活性染色、完熟種子から抽出したタンパク質を用いてSS、BE、ISA、PUL、Pho特異抗体によるウエスタン分析によってタンパク質量を解析した。いずれの系統においても澱粉合成関連酵素の活性と量は野生型と大差なかった。