オルガネラアミノ酸トランスポーターの同定とその生理機能解析

细胞器氨基酸转运蛋白的鉴定及其生理功能分析

• 批准号: 18056015
• 负责人: 柿沼 喜己
• 金额: $ 3.33万
• 依托单位: Ehime University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18056015/
• 关键词: オルガネラ; 液胞; 葉緑体; アミノ酸; トランスポーター; 能動輸送

1.酵母オルガネラアミノ酸トランスポーターOAAT遺伝子の同定と機能解析酵母AVTファミリーとVBAファミリーは液胞膜で機能するOAATである。Avt1〜7とVba1から4のC末端にMycタグを付加してウエスタン解析で検出したところ、その多くが栄養過多と窒素飢餓の間で発現量が大きく変化していた。液胞アミノ酸トランスポーターは栄養環境の変化を感知してその活性を変化させることが示唆された。また、中性アミノ酸を液胞から排出するAvt3とAvt4は、栄養条件による発現量の増減が互いに逆のパターンを示した。これら輸送基質としてのアミノ酸に対する特異性が同一のOAATの間では栄養条件による機能分担があると考えられた。2.シロイヌナズナAVT3のアミノ酸輸送活性植物培養細胞および酵母で液胞膜局在を報告したAtAVT3サブファミリーについて、GFP融合タンパクの形質転換植物を作出して植物個体レベルで液胞膜局在を確認した。さらにこれらの遺伝子を酵母で発現させ、機能相補を調べた。液胞膜を介したアミノ酸輸送は細胞レベルでのアミノ酸取り込み活性に影響を与えることが報告されている。その結果、AtAVT3aとAtAVT3bがアミノ酸輸送活性を有することがわかった。3.AtAroT1の分子機構葉緑体局在アミノ酸トランスポーターの候補遺伝子であるAt5g19500遺伝子を大腸菌で過剰発現することにより、アミノ酸輸送活性を測定した。その結果、At5g19500の過剰発現により、チロシンの輸送活性が促進された。さらに、過剰のアミノ酸の存在下で、チロシンの取り込み活性を測定したところ、芳香族アミノ酸(トリプトファン、フェニルアラニン)の取り込み活性が特異的に阻害された。この遺伝子が葉緑体における芳香族アミノ酸トランスポーターであると結論した。

1. Yeast オ ル ガ ネ ラ ア ミ ノ acid ト ラ ン ス ポ ー タ ー OAAT posthumous son 伝 の with fixed と function analytical yeast AVT フ ァ ミ リ ー と VBA フ ァ ミ リ ー は function of vacuole membrane で す る OAAT で あ る. Avt1 ~ 7 と Vba1 か ら の 4 C terminal に Myc タ グ を plus し て ウ エ ス タ ン parsing で 検 out し た と こ ろ, そ の more く が tech students.their ownship raise too much と smothering element between hunger の で 発 quantities now が き く variations change し て い た. Vacuole ア ミ ノ acid ト ラ ン ス ポ ー タ ー は の tech students.their ownship keep environment - the を perception し て そ を の activity - the さ せ る こ と が in stopping さ れ た. ま た, neutral ア ミ ノ acid を vacuole か ら discharge す る Avt3 と Avt4 は conditions, tech students.their ownship に よ る 発 amount is の raised が reduction mutual い に inverse の パ タ ー ン を shown し た. こ れ ら transmission matrix と し て の ア ミ ノ acid に す seaborne る specificity が same の OAAT の between で は tech students.their ownship raise condition に よ る function sharing が あ る と exam え ら れ た. 2. シ ロ イ ヌ ナ ズ ナ AVT3 の ア ミ ノ acid transport activity of plant culture cell お よ び yeast で vacuole membrane bureau report by を し た AtAVT3 サ ブ フ ァ ミ リ ー に つ い て, GFP fusion タ ン パ ク の form quality planning in plant を make し て plant individual レ ベ ル で vacuole membrane bureau in を confirm し た. Youdaoplaceholder0 させ れら cultural heritage 伝 を yeast で produce させ and their functions complement each other を and べた. Liquid membrane を interface し た ア ミ ノ acid conveying は cell レ ベ ル で の ア ミ ノ acid take り 込 に み activity を and え る こ と が report さ れ て い る. The そ そ results show that AtAVT3aとAtAVT3bがア そ ノ acid transport activity を has する とがわ とがわ った った. 3. AtAroT1 の molecular agency bureau of chloroplasts in ア ミ ノ acid ト ラ ン ス ポ ー タ ー の alternate heritage 伝 son で あ る At5g19500 posthumous son 伝 を coliform で before turning 発 now す る こ と に よ り, ア ミ ノ acid conveying active を test し た. Youdaoplaceholder0 そ results, At5g19500 <s:1> overprocessing occurs によ そ, チロシ チロシ <s:1> transport activity が promotes された. さ ら に, turning の ア ミ ノ で, in the presence of acid の チ ロ シ ン の take り 込 み determination of active を し た と こ ろ, aromatic ア ミ ノ acid (ト リ プ ト フ ァ ン, フ ェ ニ ル ア ラ ニ ン) の take り 込 み active が specific に resistance against さ れ た. こ の posthumous son 伝 が chloroplast に お け る aromatic ア ミ ノ acid ト ラ ン ス ポ ー タ ー で あ る と conclusion し た.

项目成果

酵母液胞アミノ酸トランスポーターの発現と機能解析

酵母液泡氨基酸转运蛋白的表达及功能分析

• 发表时间: 2007
• 作者: 関藤孝之、Chahomchuen;T.;柏尾慎治、井上智弘、稲田総子、柿沼喜己
• 通讯作者: 柏尾慎治、井上智弘、稲田総子、柿沼喜己

Nobel families of vacuolar amino acid trasnporters

液泡氨基酸转运蛋白的 Nobel 家族

• 发表时间: 2008
• 期刊: IUBMB Life (In press)60
• 作者: Sekito.T.;Fujiki;Y.;Ohsumi;Y.;Kakinuma;Y.
• 通讯作者: Y.