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狂犬病ウイルスM蛋白質が関与するストレス顆粒形成回避機構の解析

狂犬病毒M蛋白参与应激颗粒形成避免机制分析

基本信息

批准号：
22KJ2531
负责人：
児島一州
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Hokkaido University (2023)Kagoshima University (2022)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2023
资助国家：
日本
起止时间：
2023-03-08 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ2531/
关键词：
狂犬病ウイルスストレス顆粒ゲノム編集自然免疫応答 RIG-I

项目摘要

強毒型狂犬病ウイルスの西ヶ原株はストレス顆粒(SG)をほとんど誘導しない一方、弱毒型のNi-CE株は顕著にSGを誘導することに着目し、SG形成能に関与するウイルス蛋白質の特定を試みた。西ヶ原株とNi-CE株の各ウイルス蛋白質遺伝子を置換したキメラウイルスを人工的に作出してSG形成能を比較した。その結果、西ヶ原株感染細胞はSGを形成しなかった一方で、M蛋白質遺伝子を置換したキメラウイルス株感染細胞ではSGを顕著に形成したことから、M蛋白質がSG形成能に関与することを明らかにした。さらに西ヶ原株とNi-CE株のM蛋白質アミノ酸配列を比較すると29位と95位の2箇所に変異が生じていることから、西ヶ原株のM蛋白質29位および95位のアミノ酸をNi-CE株由来にそれぞれ置換したウイルス変異株[Ni(CEM29)、Ni(CEM95)]を作出し、各ウイルス株感染細胞のSG形成能を比較した。その結果、Ni(CEM95)株の感染細胞のみSG形成を顕著に誘導したことから、M蛋白質95位のアミノ酸がSG形成に重要な役割を持つことが示唆された。次に狂犬病ウイルス感染に対するSG形成の意義を検討するために、宿主のウイルスセンサー蛋白質として働くRIG-Iの局在に着目した。その結果、西ヶ原株およびNi(CEM29)株感染細胞ではRIG-Iの集積は認められなかった一方、Ni-CE株およびNi(CEM95)株感染細胞ではRIG-IのSG内集積が認められた。さらに、各感染細胞の自然免疫関連因子IFN-βの遺伝子発現量を定量化した結果、西ヶ原株感染細胞と比較してNi(CEM95)株感染細胞では遺伝子発現量が有意に高かった。したがって、狂犬病ウイルスNi-CEおよびNi(CEM95)株が誘導するSGはRIG-Iによる自然免疫応答の「場」として働いていることが示された。

The strain of virulent rabies virus (SG), the strain of attenuated rabies virus (Ni-CE), and the strain of attenuated rabies virus (Ni-CE) were responsible for the growth of rabies virus (virulent rabies virus), and the attenuated rabies strain (attenuated rabies strain) was responsible for the growth of rabies virus. The SG formation ability of the original strain Ni-CE was higher than that of the original strain of Xizang. According to the results of the experiment, we found that the infection of SG in the original strain of Xizang caused a lot of infection, and that the infection of M protein was affected by the formation of cell infection, the formation of SG, the formation of SG and the formation of SG. The origin of Ni-CE strain M protein was higher than that of CEM29 strain [Ni (CEM29), Ni (CEM95)]. The formation of SG in infected cells of different strains was much higher than that of other strains. The results showed that the infection rate of Ni (CEM95) strain was significantly higher than that of the control group (P < 0.01). The results showed that the infected cells of Ni (CEM95) strain had a positive response to the infection, and the 95 position of M protein had acid SG formation. Secondary rabies virus infection causes SG formation meaning rabies virus infection, host virus protein infection, protein infection and RIG-I formation. The results showed that the original strain Ni (CEM29) was infected with E. coli RIG-I, the other side of Ni-CE strain was infected by E. coli Ni (CEM95), and the inner cell strain of E. coli SG was infected by E. The results of quantitative analysis of the quantity of natural immune factor IFN- β in each infected cell, and the results showed that the amount of natural immune factor IFN- β in each infected cell was intentionally higher than that in Ni (CEM95) strain. The rabies virus Ni-CE virus Ni (CEM95) strain directed the SG virus RIG-I vaccine to the natural immune response.