The investigation in synthetic lethal effect of CCNE1 for ARID1A mutation in ovarian clear cell carcinoma

CCNE1对卵巢透明细胞癌ARID1A突变的综合致死作用研究

基本信息

批准号：
21K16819
负责人：
河原直紀
金额：
$ 2.91万
依托单位：
Nara Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K16819/
关键词：
ARID1A CDC6 卵巣明細胞癌合成致死 Cyclin E1 ARID1A変異

项目摘要

ARID1A変異の合成致死候補としてCyclin-E1(CCNE1)を同定し報告し、ARID1A遺伝子変異株であるTOV-21Gの皮下腫瘍移植モデルマウスにおいてもCCNE1遺伝子干渉は有意差を以って腫瘍増大抑制効果を持つことを証明した(19K09809)。CCNE1の影響をさらに明らかにするため、同スクリーニングで同定した候補遺伝子のうち細胞周期においてCCNE1と類似した作用点を持つCDC6(Cell Division Cycle 6)を用いて卵巣明細胞癌株、すなわちTOV-21G とKOC7c(ARID1A 変異株)、およびRMG-IとES2(ARID1A 野生型株)にCCNE1 またはコントロールベクターを標的とするsiRNA をトランスフェクションした。CDC6の干渉は、ARID1A遺伝子変異株の増殖を選択的に抑制したが、ARID1A野生株の増殖は抑制しなかった。更に、ARID1A 野生型株に対して、ARID1A干渉を行った上でCDC6の追加干渉を行うとコントロールに比して有意差を以って細胞増殖を抑制することを示した。以上によってCDC6干渉はARID1Aタンパク量によって細胞増殖抑制効果が異なることを示し、合成致死候補として異論のないことを確認した。細胞周期解析において、TOV-21Gに対してCDC6を干渉するとG1期の増加を認めた。TOV-21GおよびKOC7cにおいてCDC6干渉を行い、継時的にカスパーゼ3/7とアネキシンVを蛍光にて評価すると、アポトーシス細胞数の割合がコントロールと比較して有意に増加することを確認した。一方、RMG-IとES2(ARID1A 野生型株)に対して、ARID1A干渉を行った上で、CDC6の追加干渉を行うと、コントロールに比してアポトーシス細胞の割合が増加する傾向を確認した。

鉴定了Cyclin-E1（CCNE1）并报告为ARID1A突变的合成致死候选者，并证明CCNE1基因干扰在皮下肿瘤抑制性肿瘤抑制作用中具有显着差异，在皮下肿瘤移植术中，TOV-21G，一种突变的ARID1A Gene（19k09809）。为了进一步阐明CCNE1的效果，将靶向CCNE1或对照载体转染到清晰的细胞癌菌株中，即TOV-21G和KOC7C（ARID1A突变株），RMG-I和ES2，以及RMG-I和ES2（RMG-I突变株），在ARID1A野生型菌株中，在候选基因中，在CDC中进行了相似的cdc 6 cline cyccy cyccccccy。 CCNE1在细胞周期中。 CDC6干扰有选择地抑制ARID1A基因突变体的生长，但没有抑制ARID1A野生菌株的生长。此外，已经表明，与对照组相比，ARID1A野生型菌株通过进行ARID1A干扰抑制了细胞增殖，然后与ARID1A野生型菌株的其他CDC6干扰显着。这表明CDC6干扰对抑制细胞生长的影响取决于ARID1A蛋白的量，并确认没有反对作为合成致命候选者。在细胞周期分析中，对CDC6对TOV-21G的干扰显示G1相的增加。在TOV-21G和KOC7C中进行CDC6干扰，同时通过荧光评估caspase 3/7和Annexin V，并证实与对照相比，凋亡细胞的比例显着增加。另一方面，当使用RMG-I和ES2（ARID1A野生型菌株）进行ARID1A干扰，然后进行额外的CDC6干扰时，与对照组相比，凋亡细胞的比例增加。