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The investigation in synthetic lethal effect of CCNE1 for ARID1A mutation in ovarian clear cell carcinoma

CCNE1对卵巢透明细胞癌ARID1A突变的综合致死作用研究

基本信息

批准号：
21K16819
负责人：
河原直紀
金额：
$ 2.91万
依托单位：
Nara Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-04-01 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21K16819/
关键词：
ARID1A CDC6 卵巣明細胞癌合成致死 Cyclin E1 ARID1A変異

项目摘要

ARID1A変異の合成致死候補としてCyclin-E1(CCNE1)を同定し報告し、ARID1A遺伝子変異株であるTOV-21Gの皮下腫瘍移植モデルマウスにおいてもCCNE1遺伝子干渉は有意差を以って腫瘍増大抑制効果を持つことを証明した(19K09809)。CCNE1の影響をさらに明らかにするため、同スクリーニングで同定した候補遺伝子のうち細胞周期においてCCNE1と類似した作用点を持つCDC6(Cell Division Cycle 6)を用いて卵巣明細胞癌株、すなわちTOV-21G とKOC7c(ARID1A 変異株)、およびRMG-IとES2(ARID1A 野生型株)にCCNE1 またはコントロールベクターを標的とするsiRNA をトランスフェクションした。CDC6の干渉は、ARID1A遺伝子変異株の増殖を選択的に抑制したが、ARID1A野生株の増殖は抑制しなかった。更に、ARID1A 野生型株に対して、ARID1A干渉を行った上でCDC6の追加干渉を行うとコントロールに比して有意差を以って細胞増殖を抑制することを示した。以上によってCDC6干渉はARID1Aタンパク量によって細胞増殖抑制効果が異なることを示し、合成致死候補として異論のないことを確認した。細胞周期解析において、TOV-21Gに対してCDC6を干渉するとG1期の増加を認めた。TOV-21GおよびKOC7cにおいてCDC6干渉を行い、継時的にカスパーゼ3/7とアネキシンVを蛍光にて評価すると、アポトーシス細胞数の割合がコントロールと比較して有意に増加することを確認した。一方、RMG-IとES2(ARID1A 野生型株)に対して、ARID1A干渉を行った上で、CDC6の追加干渉を行うと、コントロールに比してアポトーシス細胞の割合が増加する傾向を確認した。

ARID1A variant synthetic lethal candidate for Cyclin-E1(CCNE1) is identified and reported. ARID1A variant is identified as TOV-21G variant for subcutaneous tumor transplantation. CCNE1 variant is identified as a mutant with an increased tumor inhibition effect (19K 09809). CCNE1's influence on cell cycle is similar to that of CDC 6. CCNE1's influence on cell cycle is similar to that of CDC6 (Cell Division Cycle 6) siRNA targeting CCNE1 is used in cell carcinoma strains, TOV-21G and KOC 7c (ARID 1A variant), RMG-I and ES2(ARID1A wild-type strain). CDC6, ARID 1A, and ARID 1A were selected to inhibit the proliferation of wild plants. In addition, ARID1A wild-type strains are also shown to inhibit cell proliferation by increasing the number of stem cells in CDC6. The above CDC6 stem cells were identified by ARID1A, and the results of cell proliferation inhibition were identified by synthetic lethal candidates. Cell cycle analysis, TOV-21G, CDC6 and G1 phase progression TOV-21G and KOC7C were selected for the CDC6 stem cell count evaluation, and the CDC 7 stem cell count evaluation. In one case, RMG-I and ES2 (ARID1A wild-type strain) showed a tendency to increase the number of cell junctions, ARID1A stem cells and CDC6 stem cells.