Investigating the mechanism of placental amnion-chorion membranes on periodontal regeneration

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2022年度の研究実績In vivoでは，10週齢のWistarラットの上顎第一臼歯近心に規格化欠損を形成後ルートプレーニングし，歯周組織欠損を作製した。HACM＋HPC応用群，HPC単独群，Unfilled群に分け，術後4週で形態学的 (マイクロCT)，組織学的(H-E染色)にて検討した。2021年度では術後2週での評価を行い，マイクロCT画像による歯槽骨形成量の解析では，HACM+HPC群で新生骨様構造を認めた。さらに，骨梁構造解析でHACM+HPC群はHPC，Unfilled群と比較し骨体積率で有意に高い値を示した。2022年度では術後4週での評価を行い，HACM+HPC群はHPC，Unfilled群と比較し骨体積率で有意に高い値を示した。術後4週のH-E染色においてHACM+HPC 群では，Unfilled，HPC群と比較し，新生骨様構造が多く観察され，術後2週と同様の傾向を示した。また,免疫組織化学染色(VEGF，α-SMA)を行い血管新生についても評価を行った。In vitroでは，HACMをPBS中に溶解したHACM extract (100-500 ug/ml)を作製し，ELISAにてVEGFおよびFGF-2の濃度を測定した。ラットより採取した歯根膜由来細胞の培養液中にHACM extractを滴下し，細胞増殖能をWST-1，細胞遊走能をWound healing assayにより評価した。2022年度も引き続き同様の評価を行い，VEGFおよびFGF-2の成長因子が含めれている100 ug/ml のHACM Extractは，Control群と比較して歯根膜由来細胞の増殖および遊走の促進を認めた。以上のことからHACMの含有成分が歯根膜由来細胞の増殖および遊走を促すことで，歯周組織治癒を促進させることが示唆された。