化合物スクリーニングによる小児肝芽腫に対する新規治療候補薬の機能解析

通过化合物筛选对小儿肝母细胞瘤新候选药物进行功能分析

• 批准号: 22K15554
• 负责人: 水野 裕貴
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: Tokyo Medical and Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K15554/
• 关键词: 肝芽腫; 化合物スクリーニング; 新規治療候補薬

小児固形がんの一種である肝芽腫に対する新規治療候補薬の選出および機能解析のために、肝芽腫の細胞株HepG2に対して、100種類のランダムな治療候補化合物ライブラリーを用いた薬剤投与スクリーニングにより、最も効果が高く、既存の報告がない薬剤として、TanespimycinとNMS-E973を選出した。この二剤はともに分子シャベロンであるHSP90の阻害剤であり、特にTanespimycinは様々の小児固形がんの患者に対する第一相試験が米国で行われ、肝芽腫に対する効果も期待できる有望な薬剤である。肝芽腫細胞株HepG2とHuh6それぞれにおいて、WST8AssayによりTanesipimycinが濃度依存的、時間依存的に増殖抑制効果を示すことを確認した。また、それぞれの細胞株において、TanespimycinがDNAダメージとアポトーシスを誘導することで抗腫瘍効果を発揮することをウエスタンブロットで確認した。HSP90阻害薬は、癌増殖に必要なRAFやAKT、HER2といったタンパクの発現を低下させることが他の癌腫で報告されている。肝芽腫の細胞株にTanespimycinを投与してp-Akt、cRaf、HER2の発現をウエスタンブロットで評価したところ、これらの発現が著明に投与前と比較して低下・消失することが確認された。肝芽腫細胞株において、Tanespimycinはこれらの腫瘍増殖に必要なタンパクの発現維持を阻害することにより、抗腫瘍効果を発揮することが示唆された。また、フローサイトメトリーによる細胞周期解析で、Tanespicyminが肝芽腫細胞株HepG2、Huh6両者に対して時間依存的にG2期細胞が増加することが確認され、TanespimycinがG2arrestを誘導して腫瘍増殖抑制効果を示していると考えられた。

Selection of new therapeutic candidate compounds and functional analysis of small cell types, HepG2 cell line, 100 types of new therapeutic candidate compounds, selection of most effective compounds, selection of existing reports, Tanespimycin and NMS-E973. The first phase of the study was conducted in the United States and in the liver. HepG2 and Huh6 cell lines were identified by the WST8 Assay for concentration-dependent and time-dependent inhibition of proliferation. In addition, the expression of tanescin was also detected in the cell lines. HSP90 is essential for preventing cancer growth, RAF, AKT and HER2 from occurring and reporting other cancers. The expression of Tanespimycin in liver bud cell lines was evaluated and confirmed by comparison with that of p-Akt, cRaf and HER2. The development and maintenance of tumor growth and development of anti-tumor effect in hepatoma cell lines were inhibited by Tanespimycin. Cell cycle analysis, Tanespicin and HepG2 cell lines, Huh6 cell lines, and time-dependent G2arrest induction by Tanespicin were confirmed.