Establishment and validation of the methods for the production of antibody-drug conjugates against malignant skin tumors

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抗体薬物複合体は新しい作用機序をもつ分子標的薬であるが、皮膚がん治療における知見はいまだ少ない。また、研究用として利用できる抗体薬物複合体も限られているため、関連する研究の促進が妨げられている。そこで本研究では、皮膚がんに対する分子標的治療に応用可能な標的分子の同定と、それに対する抗体薬物複合体の作製法を確立してその有効性を検証することを目的としている。令和4年度は、主に皮膚がん細胞を用いて標的分子の同定を行った。具体的には、正常な皮膚細胞（表皮角化細胞、表皮メラノサイト）と皮膚がん細胞株（有棘細胞癌1種、メラノーマ2種）からRNAを抽出してマイクロアレイによって各種遺伝子の発現を比較し、がん細胞において高く発現している遺伝子を検索した。マイクロアレイの結果から、有棘細胞癌では82種、メラノーマでは42種の遺伝子の発現が、正常細胞に比較して増加していた。さらに、発現増加の程度が高かった上位の遺伝子に関してリアルタイムPCRで遺伝子発現を検証したところ、マイクロアレイと同じ結果を示す遺伝子が30種（有棘細胞癌で12種、メラノーマで18種）選出されたが、このうち市販の抗体が利用可能なものに関して、ウエスタンブロットと免疫染色を行ってタンパク質発現を確認した。その結果、メラノーマで発現が増加していた3種の標的候補分子はタンパク質としても発現されていたが、タンパク質発現が細胞膜に局在していたのは1種のみであった。抗体薬物複合体は細胞膜上の標的分子を認識して結合するため、この1種を今後の検討の第一候補として選出することができた。これを受けて、抗体薬物複合体の作製に必要な試薬類を準備し、詳細な作製条件の検討に着手している。