大規模ゲノミクスと機能的スクリーニングに基づく新規がん治療標的の探索

基于大规模基因组学和功能筛选寻找新的癌症治疗靶点

• 批准号: 22K16323
• 负责人: 平林 茂樹
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16323/
• 关键词: がん; 血液腫瘍; CRISPRスクリーニング

近年のゲノム解析の進展により、血液腫瘍・がんの発症・維持に関与する遺伝子異常が複数同定され、それらに対する分子標的薬が開発されてきた。しかし、腫瘍に多様なクローンが存在するために、一部のクローンを分子標的薬で駆逐しても治療抵抗性の他のクローンが増殖し、根治がしばしば困難である。それゆえ、今なお従来の化学療法が欠かせないものとなっている。本研究ではがん細胞と正常細胞の生存に必須な遺伝子を同定することで、重篤な有害事象を抑えながらも血液腫瘍を主とした多彩ながんに奏功する新規治療法の開発を目指しており、がん細胞の生存に必須な遺伝子をノックアウトする独自のgRNAのプラスミドライブラリを作製する必要があった。そのため、2022年度はgRNAのプロトスペーサー配列に対応するオリゴプールのcomplexityを損なわないようにプラスミドにクローニングする条件(PCR、プラスミドのアセンブリ方法、コンピテントセルへの導入方法等)を検討し最適化した。また、臍帯血の造血幹細胞で行う前に独自に作製したライブラリを用いて実際にCRISPRスクリーニングを細胞株で行い、ライブラリのcomplexityが損なわれていないことを確認し、positive controlとnegative controlが正しくCRISPRスクリーニングの系がワークすることを確認した。また、作用機序の解明のために必要なdTAGシステムが必要であるので、白血病細胞株の内在性の標的遺伝子に効率よくタンパク質分解のタグであるFKBP12 F36Vを効率良くノックインする条件を検討した。実際に、FKBP12をノックインした白血病細胞株にdTAGを投与し標的タンパク質分解の表現型が生じることを確認した。

In recent years, the development of molecular markers in the analysis of hematological diseases, the development of diseases, the maintenance of genetic abnormalities, and the development of other molecular markers has been studied. There are many kinds of tumors, some of which are molecular targets, and some of which are resistant to treatment. The treatment of cancer is very effective. This study aims to identify the genes necessary for the survival of normal cells and cells, and to control the development of novel therapies for the suppression of harmful events. In 2022, we will discuss the optimization of the conditions for the selection and allocation of gRNA (PCR, selection and extraction method, introduction method of gRNA). CRISPR cell line is isolated from umbilical cord blood hematopoietic stem cells and the complexity of CRISPR cell line is determined by positive control and negative control. To clarify the mechanism of action, the necessary conditions for the development of FKBP12F36V are discussed. In fact, FKBP12 is a leukemia cell line that has been identified by dTAG and phenotype analysis.

项目成果

A Genome-Wide CRISPR-Cas9 Screen Reveals GATOR1 Complex Is a Critical Regulator of Glucocorticoid Sensitivity in B-Cell Precursor Acute Lymphoblastic Leukemia

全基因组 CRISPR-Cas9 筛选揭示 GATOR1 复合物是 B 细胞前体急性淋巴细胞白血病中糖皮质激素敏感性的关键调节因子

• 发表时间: 2022
• 作者: Hiroshi Imanaga;Yuichiro Semba;Kensuke Sasaki;Kiyoko Miyata;Takuji Yamauchi;Tatsuya Terasaki;Fumihiko Nakao;Shigeki Hirabayashi et al.
• 通讯作者: Shigeki Hirabayashi et al.

CRISPRスクリーンによりB-ALLにおけるグルココルチコイド感受性の制御因子としてGATOR1complexを同定

CRISPR 筛选鉴定 GATOR1 复合物是 B-ALL 糖皮质激素敏感性的调节因子

• 发表时间: 2022
• 作者: 今永博;平林茂樹;赤司浩一;前田高宏
• 通讯作者: 前田高宏

Mitochondrial E3 ligase complex regulates venetoclax sensitivity via modulating BAX equilibrium

线粒体 E3 连接酶复合物通过调节 BAX 平衡调节 Venetoclax 敏感性

• 发表时间: 2022
• 作者: 中尾文彦;仙波雄一郎;宮田喜代子;山内拓司;野上順平;今永博;寺崎達也;宮崎眞佳;平林茂樹;増田豪;赤司浩一;前田高宏
• 通讯作者: 前田高宏

Effect of Multiple HLA Locus Mismatches on Outcomes after Single Cord Blood Transplantation.

多个 HLA 位点不匹配对单脐带血移植后结果的影响。

• DOI: 10.1016/j.jtct.2022.05.005
• 发表时间: 2022
• 期刊: Transplant Cell Ther.
• 作者: Kanda J;Hirabayashi S;Yokoyama H;Kawase T;Tanaka H;Uchida N;Taniguchi S;Takahashi S;Onizuka M;Tanaka M;Sugio Y;Eto T;Kanda Y;Kimura T;Ichinohe T;Atsuta Y;Morishima S.
• 通讯作者: Morishima S.

GATOR1 complex is a critical regulator of glucocorticoid sensitivity in B-ALL cells

GATOR1 复合物是 B-ALL 细胞中糖皮质激素敏感性的关键调节因子

• 发表时间: 2022
• 作者: 今永博;仙波 雄一郎;佐々木謙介;宮田喜代子;山内拓司;寺崎達也;中尾文彦;平林茂樹;野上順平;赤司浩一;前田高宏
• 通讯作者: 前田高宏