Novel biomarker for thymic epithelial tumors by using multiple immunostaining

使用多重免疫染色的胸腺上皮肿瘤的新型生物标志物

• 批准号: 22K16575
• 负责人: 石原 駿太
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: Kyoto Prefectural University of Medicine
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Early-Career Scientists
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-22K16575/
• 关键词: 多重免疫染色; 胸腺腫; 胸腺上皮性腫瘍; biomaker

2022年度は、小児胸腺および胸腺腫内のリンパ球について多重免疫染色を実施した。小児胸腺のパラフィンブロック(FFPE)切片を用いてCD4/CD8/CD3の多重免疫染色を行い、皮質に未熟リンパ球（CD4+/CD8+）が多く、髄質に成熟リンパ球に(CD3+/CD4+ or CD3+/CD8+)が多い事を確認した。続いて小児胸腺と胸腺腫のFFPEを用いてCD4/CD8/CD7/CD5/CD3/CD69/PD-1の多重免疫染色を行った。胸腺腫の腫瘍内リンパ球のPD-1発現率は、未熟段階であるCD4/CD8 double negativeのCD7+/CD5-からCD7+/CD5+で発現率が上昇し、CD4/CD8 double positiveのCD3-/CD69-では一旦低下するが、成熟リンパ球となるCD3+/CD69+では大幅に上昇する事がわかった。これは正常胸腺での成熟過程におけるPD-1発現の傾向と同様であった。次に胸腺腫の腫瘍内リンパ球の性質を多重免疫染色で識別するために、一次抗体の選定を行っている。成熟段階の未熟T細胞、ナイーブT細胞、Th1、Th2、濾胞性T細胞、制御性T細胞、Th17について識別できるように、CD45/CD4/CD8/CD3/TdTについては、これまでの実験で使用していた抗体を用い、T-bet/GATA3/Bcl6/Foxp3/CD95/CCR7/RORγについては、新規に一次抗体を選定しvalidationを行った。Positive control（小児胸腺、扁桃）での染色性は概ね良好であった。また胸腺腫の臨床検体を用いて多重免疫染色を行い、ある程度良好な染色性が得られる事を確認した。

In 2022, the multiplex immunostaining of the small thymus and the thymus tumor were performed. Small thymus FFPE (FFPE) sections were prepared using multiplex immunostaining for CD4/CD8/CD3.い、Cortical immature リンパパに（CD4+/CD8+） が多く、髄色 にMature リンパパに (CD3+/CD4+ or CD3+/CD8+)が多い事をconfirmした. The FFPE of the small thymus and thymoma was performed using multiplex immunostaining of CD4/CD8/CD7/CD5/CD3/CD69/PD-1. The occurrence rate of PD-1 in the thymoma is は, the immature stage is CD4/CD8 double negative, the occurrence rate of CD7+/CD5- is CD7+/CD5+ is increased, and the CD4/CD8 double The positive CD3-/CD69- is low once it is low, and the mature リンパball is CD3+/CD69+ and it rises sharply. The maturation process of the normal thymus is the same as the tendency of PD-1 development. The nature of the neutrophils in the subthymoma, the identification of multiple immunostainings, and the selection of primary antibodies were carried out. Mature stage immature T cells, ナイーブT cells, Th1, Th2, filter T cells, control T cells, Th 17についてidentificationできるように、CD45/CD4/CD8/CD3/TdTについては、これまでの実験で用していたantibodiesを用い、T-bet/GATA3/Bcl6/Foxp3/CD95/CCR7/RORγについては、New regulations にPrimary antibody をselected しvalidation を行った. Positive control (small thymus, tonsil) has good staining properties and good staining properties. The clinical diagnosis of thymoma was confirmed by multiplex immunostaining and the staining properties were good.

项目成果

Characteristic differences in the abundance of tumor-infiltrating lymphocytes and intratumoral developing T cells in thymoma, with special reference to PD-1 expression

• DOI: 10.1007/s00262-023-03431-5
• 发表时间: 2023-04-15
• 期刊: CANCER IMMUNOLOGY IMMUNOTHERAPY
• 影响因子: 5.8
• 作者: Furuya，Tatsuo;Ishihara，Shunta;Inoue，Masayoshi
• 通讯作者: Inoue，Masayoshi