Novel biomarker for thymic epithelial tumors by using multiple immunostaining

2022年度は、小児胸腺および胸腺腫内のリンパ球について多重免疫染色を実施した。小児胸腺のパラフィンブロック(FFPE)切片を用いてCD4/CD8/CD3の多重免疫染色を行い、皮質に未熟リンパ球（CD4+/CD8+）が多く、髄質に成熟リンパ球に(CD3+/CD4+ or CD3+/CD8+)が多い事を確認した。続いて小児胸腺と胸腺腫のFFPEを用いてCD4/CD8/CD7/CD5/CD3/CD69/PD-1の多重免疫染色を行った。胸腺腫の腫瘍内リンパ球のPD-1発現率は、未熟段階であるCD4/CD8 double negativeのCD7+/CD5-からCD7+/CD5+で発現率が上昇し、CD4/CD8 double positiveのCD3-/CD69-では一旦低下するが、成熟リンパ球となるCD3+/CD69+では大幅に上昇する事がわかった。これは正常胸腺での成熟過程におけるPD-1発現の傾向と同様であった。次に胸腺腫の腫瘍内リンパ球の性質を多重免疫染色で識別するために、一次抗体の選定を行っている。成熟段階の未熟T細胞、ナイーブT細胞、Th1、Th2、濾胞性T細胞、制御性T細胞、Th17について識別できるように、CD45/CD4/CD8/CD3/TdTについては、これまでの実験で使用していた抗体を用い、T-bet/GATA3/Bcl6/Foxp3/CD95/CCR7/RORγについては、新規に一次抗体を選定しvalidationを行った。Positive control（小児胸腺、扁桃）での染色性は概ね良好であった。また胸腺腫の臨床検体を用いて多重免疫染色を行い、ある程度良好な染色性が得られる事を確認した。

2022年度は、小児胸腺および胸腺腫内のリンパ球について多重免疫染色を実施した。小児胸腺のパラフィンブロック(FFPE)切片を用いてCD4/CD8/CD3の多重免疫染色を行い、皮質に未熟リンパ球（CD4+/CD8+）が多く、髄質に成熟リンパ球に(CD3+/CD4+ or CD3+/CD8+)が多い事を確認した。続いて小児胸腺と胸腺腫のFFPEを用いてCD4/CD8/CD7/CD5/CD3/CD69/PD-1の多重免疫染色を行った。胸腺腫の腫瘍内リンパ球のPD-1発現率は、未熟段階であるCD4/CD8 double negativeのCD7+/CD5-からCD7+/CD5+で発現率が上昇し、CD4/CD8 double positiveのCD3-/CD69-では一旦低下するが、成熟リンパ球となるCD3+/CD69+では大幅に上昇する事がわかった。これは正常胸腺での成熟過程におけるPD-1発現の傾向と同様であった。次に胸腺腫の腫瘍内リンパ球の性質を多重免疫染色で識別するために、一次抗体の選定を行っている。成熟段階の未熟T細胞、ナイーブT細胞、Th1、Th2、濾胞性T細胞、制御性T細胞、Th17について識別できるように、CD45/CD4/CD8/CD3/TdTについては、これまでの実験で使用していた抗体を用い、T-bet/GATA3/Bcl6/Foxp3/CD95/CCR7/RORγについては、新規に一次抗体を選定しvalidationを行った。Positive control（小児胸腺、扁桃）での染色性は概ね良好であった。また胸腺腫の臨床検体を用いて多重免疫染色を行い、ある程度良好な染色性が得られる事を確認した。