アクチン様タンパク質Human ARP2、ARP3の細胞内における機能の解明

阐明人类 ARP2 和 ARP3 肌动蛋白样蛋白的细胞内功能

• 批准号: 09780666
• 负责人: 大沼 雅明
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Kurume University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09780666/
• 关键词: 細胞骨格; アクチン; 血小板; リン酸化; ARP2; 3; TRAP

本研究遂行中、WelchらによってARP2,.ARP3は他の複数のタンパク質と複合体を作っていることが明らかになり、以後この複合体(Arp2/3)の細胞内での動態を調べるべく研究計画を変更した。まずHuman ARP2,ARP3に対するウサギポリクローナル抗体を作製し、この抗体を用いてヒト血小板を材料としてその局在を調べたところ、ARP2/3は未刺激の血小板では主に細胞質画分に存在するが、TRAPによって血小板刺激を行うと細胞質画分から細胞骨格画分に移行することが示された。ARP2/3の細胞骨格画分への移行は、血小板凝集を阻害する抗体の存在下では阻害を受けなかったが、PI3-kinaseインヒビターであるwortomanninや、rhoに対する特異的なインヒビターであるedinの存在下で阻害を受けることが示された。このことにより、ARP2/3の細胞内局在性がTRAPのターゲットであるトロンビンレセブターおよびその下流に位置するPI3-kinase、rhoを介するシグナル伝達経路のさらに下流で制御されていることが示された。また血小板をCalyculin等のプロテインフォスファターゼインヒビターで処理すると、細胞骨格画分中のARP2/3が速やかに消失することが分かった。このことはARP2/3の細胞内局在の制御にタンパク質リン酸化が何らかの形で関与していることを示しているが、現在までのところARP2およびARP3のリン酸化が局在性の制御に関わっているという結果は得られておらず、Arp2/3を構成している別のサブユニットのリン酸化によって局在性の制御がなされている可能性がある。

在这项研究过程中，Welch等人。揭示了Arp2，.arp3与其他多种蛋白质复合，并且更改了研究计划以研究该复合物的细胞内动力学（ARP2/3）。首先，制备针对人ARP2和ARP3的兔多克隆抗体，并使用这种抗体使用人血小板作为一种材料检查了定位，并且表明ARP2/3主要存在于未刺激的血小板中，但是当血小板刺激与Trap一起迁移时，它会迁移到cytract to cytoctopopopopopopopopopopopopopopopopopopopy fraction。在存在抑制血小板聚集的抗体的情况下，ARP2/3向细胞骨架级分的过渡并未抑制，但在存在PI3-激酶抑制剂和EDIN（一种特定的RHO）的EDIN（EDIN）的情况下被证明会抑制。这表明ARP2/3的亚细胞定位通过陷阱靶凝血酶受体以及PI3-激酶和RHO的下游进一步调节信号通路的下游。还发现，用蛋白质磷酸酶抑制剂（例如钙钙蛋白酶）治疗血小板，迅速消除了细胞骨架分数中的ARP2/3。这表明蛋白质磷酸化在某种程度上参与了ARP2/3的亚细胞定位的调节，但是迄今为止，尚无结果，即ARP2和ARP3的磷酸化与定位有关，并且可能通过构成Arp2/3的另一个亚基的磷酸化来控制定位。

项目成果

A.G.Terasaki,M.Ohnuma,and I.Mabuchi: "Identification of Actin-Binding Proteins from Sea Urchin Eggs by F-actin Affinity Column Chromatography" Journal of Biochemistry. 122・1. 226-236 (1997)

A.G. Terasaki、M. Ohnuma 和 I. Mabuchi：“通过 F-肌动蛋白亲和柱色谱法鉴定海胆卵中的肌动蛋白结合蛋白”《生物化学杂志》122・1（1997 年）。