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神経組織の形態形成に関与する糖蛋白質糖鎖認識分子の探索と解析

参与神经组织形态发生的糖蛋白糖链识别分子的搜寻与分析

基本信息

批准号：
10760065
负责人：
吉田雪子
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

脳・神経組織の形態形成に必須であると推定される非還元末端にN-アセチルグルコサミン(GlcNAc)を有する糖鎖の生物学的意義を解明するために、その糖鎖を認識する蛋白質の存在を明らかにしその分子の同定を行うことを目的として研究を行った.マウス脳の細胞質画分及び膜画分を用いて種々のN型糖鎖に結合する蛋白質の有無を検索した結果、数種類の結合蛋白質の存在が確認された。これらの中で、特異的に単糖やオリゴ糖等で結合阻害が見られるもの、固定化した糖鎖から特異的な糖で溶出できるものという観点から解析を重ねた。その結果、3本鎖のN型糖鎖を多く有するウシ胎児血清蛋白質(フェチュイン)をシアリダーゼ、βガラクトシダーゼ処理することにより非還元末端をGlcNAcにしたものを固定化した担体を用いて、成体マウス脳の細胞質画分よりGlcNAcのオリゴ糖であるキトオリゴ混合物で特異的に溶出できる蛋白質を2種類(p45,p26)見いだした。これらは、高濃度の塩やキレート剤では溶出されないことから、今まで報告のあるレクチン蛋白質とは性質の異なるものであると考えられる。そこで、これらの蛋白質の大量精製を行い、プロテアーゼ消化物をHPLC精製し、現在アミノ酸配列の解析を行っているところである。今後、これらの情報を元に遺伝子のクローニング、蛋白質の糖鎖結合部位の特定等の解析を進めていく予定である。

To understand the biological significance of the presence of glycoproteins in the non-reductive terminal region (GlcNAc), which is essential for the morphogenesis of the brain tissue, to understand the molecular identity of proteins, and to study the purpose of this study. The presence or absence of proteins bound by N-type glycoproteins in the cytoplasm and membrane of the cells was detected and the presence of several binding proteins was confirmed. The binding resistance of the intermediate and specific sugars is detected by the immobilized sugars, and the dissolution of the intermediate and specific sugars is detected by the immobilized sugars. As a result, the N-type glycans of the 3-nucleotide sequence have been isolated from fetal serum protein (FSP), and the β-glucuronidase has been isolated from the non-reducing terminal of FSP. The protein is immobilized on the carrier, and the cytoplasmic fraction of FSP in adult FSP has been isolated from the mixture of FSP and β-glucuronidase. This is the case with high concentrations of protein. A large amount of protein was purified by HPLC, and the acid sequence was analyzed. In the future, the analysis of information elements, proteins and sugar lock binding sites will be further determined.