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Brassica rapaの形質転換系の確立および巨大ゲノム断片の導入に関する研究

油菜转化体系建立及基因组大片段导入研究

基本信息

批准号：
10760189
负责人：
柴博史
金额：
$ 1.47万
依托单位：
Nara Institute of Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至 1999
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10760189/
关键词：
自家不和合性 BACライブラリー Brassica rapa SLG SRK SP11

项目摘要

平成10年度に作製したB.RapaゲノムDNAのBACライブラリーからSLG,SRK遺伝子を含むクローンをスクリーニングした。既にスクリーニングを終えた20000クローンを除く残り50000クローンのBACライブラリーを雌しべ側自家不和合性遺伝子であるSLG、SRK遺伝子をプローブに用いてコロニーハイブリダイゼーションを行ったところ、5つのポジティブクローンが得られた。これらのコロニーを鋳型としてそれぞれの遺伝子を増幅するプライマーを用いてPCR増幅したところ、72kbの断片を含む1クローンのみが両遺伝子を含み、残りのクローンはSLG遺伝子が欠けていた。そこで72kbの断片を含むクローンを用いてSRK遺伝子周辺をシークエンスしたところ、SRK遺伝子の約10kb上流に他のS系統で明らかになった花粉発現遺伝子SP11遺伝子とアミノ酸配列で約40%の相同性を示す遺伝子が見つかった。シグナル配列部分を他の系統で得られたSP11遺伝子の配列と比較すると、70%以上の相同姓を示し、また8つのシステイン残基が保存されていることからこの遺伝子はSP11遺伝子であると断定した。次にSLG、SRK、SP11遺伝子間でlong and accurate(LA)PCRを行ったところ、SP11遺伝子はSLG遺伝子とSRK遺伝子間に位置し、それぞれの距離は約22kb,9kbであった。現在、上記72kbのクローンを制限酵素NotIを用いて切り出し、バイナリーBACベクターpBIGRZへの導入を試みている。今後、バイナリーBACベクターに導入したクローンを、B.Rapaに近縁で自家和合性を示すアラビドプシスに導入して自家不和合性が獲得されるかどうかを明らかにしたいと考えている。

B.Rapa is the first company to produce BAC DNA, SLG and SRK DNA. Both SLC and SRK are used in BAC, SRK, SR This is the first time I've ever seen a woman who's had sex with a child. The 72kb fragment contains a fragment of SRK gene, and the SRK gene contains a fragment of SRK gene. The SRK gene contains a fragment of SRK gene. The SRK gene contains a fragment of SRK gene. The SRK gene contains a fragment of SRK gene. The SRK gene contains a fragment of SRK gene. More than 70% of the same sequence residues were found in the SP11 gene sequence in other systems. SLG, SRK and SP11 genes are long and accurate(LA)PCR sequences. The distance between SLG, SRK and SP11 genes is about 22kb and 9kb. Now, note the 72kb restriction enzyme NotI in the middle of the cut out, BAC in the middle of the cut out, pBIGRZ in the middle of the cut out. In the future, BAC will introduce new technologies, B.Rapa will introduce new technologies, and B.Rapa will introduce new technologies to improve its own compatibility.