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歯周病原因菌が産生する細胞膨張壊死因子CDTの標的蛋白の同定とその作用機序の解明

牙周病致病菌产生的细胞扩张坏死因子CDT靶蛋白的鉴定及作用机制的阐明

基本信息

批准号：
12771099
负责人：
才木桂太郎
金额：
$ 1.28万
依托单位：
The Nippon Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

若年性歯周炎の原因菌Actinobacillus actinomycetemcomitansが産生する毒素cytolethal distending toxin(CDT)は、KB細胞等のヒト上皮様培養細胞に細胞膨張を誘発し細胞分裂をG_2期で停止させ細胞を壊死に至らしめる。CDTは、CdtA, CdtB, CdtC蛋白から構成される毒素複合体である(Saikiら、2001)。今年度は、CdtA, CdtB, CdtCサブユニットの機能的役割の同定を行った。まず、個別に精製したCdtA, CdtB, CdtC蛋白をKB細胞内に強制導入して、KB細胞に対する効果を調べた。強制導入したCdtB蛋白はCDT活性を示したのに対して、強制導入したCdtAおよびCdtC蛋白はCDT活性を示さなかった(才木ら、未発表データ)。従って、CdtB蛋白がCDTの活性サブユニットであると考えられる。一方、(1)CdtA、(2)CdtB、(3)CdtC蛋白が発現した細胞抽出液をKB細胞の培養液に加えてKB細胞に結合させてから洗浄し、それぞれ、(1)CdtBとCdtC、(2)CdtAとCdtC、(3)CdtAとCdtBが発現した細胞抽出液を培養液に加えてCDTの細胞膨張壊死効果を調べた。標的細胞の細胞外から加えたCDTの毒素活性にはCdtA, CdtB, CdtC蛋白が全て必要であることから(Saikiら、2001)、洗浄後にもCDTサブユニットがKB細胞に吸着していれぱCDT活性を示すはずである。(1)と(3)はCDT活性を示したのに対して(2)は全くCDT活性を示さなかった(才木ら、未発表データ)。従って、CdtAとCdtC蛋白はKB細胞に対する結合能を有することが示された。以上の結果、CDTは、CdtBサブユニットが活性を(active site)、CdtAとCdtCサブユニットが結合の機能(binding site)を担うA-B毒素であると考えられる。

If the pathogenic bacteria of annual periodontitis, such as Actinobacillus actinomycetemcomitans, cytolethal distending toxin (CDT), KB cells, and so on, the epithelial cells were cultured, the cells were expanded, the cells were divided, and the cell division was stopped. The cells died and died. The proteins of CDT, CdtA, CdtB and CdtC were transformed into antitoxin complexes (Saiki, 2001). For the current year, CdtA, CdtB, and CdtC, the service cutting of the operating capacity of the equipment will be the same as that of the bank. CdtA, CdtB and CdtC proteins were isolated from the cells of KB and KB, respectively. The CDT activity of CdtB protein shows the activity of CdtC protein, the activity of CDT protein shows the activity of CdtC protein, and the activity of CDT protein shows the activity of protein. The activity of CdtB protein, CDT protein, protein and protein. One side, (1) CdtA, (2) CdtB, (3) CdtC protein cell extract, KB cell culture solution, plus KB cell culture solution combined with CdtB cell culture, (1) CdtB cell culture, (2) CdtA cell CdtC, (3) CdtA protein cell extract, cell culture solution, CDT cell culture solution, cell culture solution, cell culture solution, It is necessary to add CDT toxin activity to CdtA, CdtB, CdtC protein (Saiki, 2001). After washing, it is necessary to inhale the KB cell after washing. The CDT activity shows that the CDT activity is low. (1) the CDT activity (3) shows the total CDT activity (2) the total CDT activity shows the activity of the tree (but not the table). The combination of KB protein, CDT protein, CDT protein and CDT protein could be detected by the combination of CDT protein and CDT protein. The above results, CDT, CdtB, CDT, CDT,