口腔細菌が産生する細胞壊死因子の同定とそのメカニズムの解明

口腔细菌产生的细胞坏死因子的鉴定及其机制的阐明

• 批准号: 10771002
• 负责人: 才木 桂太郎
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: The Nippon Dental University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10771002/
• 关键词: 口腔細菌; 若年性歯周炎; 細胞壊死因子; 若年性歯周病; 細胞懐死因子; ネクローシス

Actinobacillus actinomycetemcomitans 29522株からクローニングしたcytolethal distending toxin(CDT)をコードするcdtABC遺伝子の大腸菌発現系を構築し、cdtA,cdtB,cdtC遺伝子の1つまたは2つを欠失した計6種の変異体(cdtBC,cdtAC,cdtAB,cdtA,cdtB,cdtC)を作製した。また、本毒素が精製困難であるため、CdtA,CdtB,CdtC蛋白をそれぞれ個別に精製し、本毒素の再構成を試みた。CDTの毒素活性は、口腔上皮様培養細胞(KB細胞)に引き起こされる形態変化(細胞膨張)と細胞周期G_2期停止活性を指標にして同定した。作成した6種の変異体のうち、cdtBC,cdtAC,cdtAB,cdtA,cdtC変異体が弱いながらも毒素活性を示したのに対して、cdtB変異体は毒素活性を示さなかった。更に、本毒素活性は、3種の精製CdtA,CdtB,CdtC蛋白全てを加えることで再構成された。以上の結果、1)CdtAとCdtCは単独でCDT活性を示し、CdtBはCDTの活性を増強すること、2)3種のCdtA,CdtB,CdtC蛋白のみ存在すれば、CDT活性は完全であることが示唆された。

Actinobacillus actinomycetemcomitans 29,522 strains ら ロ ロ ニ ニ <e:1> グ た たcytolethal distending Toxin (CDT) を コ ー ド す る cdtABC posthumous son 伝 の coliform 発 を build し, cdtA, cdtB, cdtC posthumous son 伝 の 1 つ ま た は 2 つ を owe lost し た meter six の - variants (cdtBC cdtAC, cdtAB, cdtA, cdtB, cdtC) を cropping し た. ま た, difficulty this toxin が refined で あ る た め, CdtA CdtB, CdtC protein を そ れ ぞ れ individual に refined し, try again this toxin の constitute を み た. CDT toxin activity, oral epithelial-sample cultured cells (KB cells)に induce される morphological change (cell expansion)と cell cycle G_2 phase cessation activity を indicators に て て are the same as that of た た. Make し た six の - variant の う ち, cdtBC cdtAC, cdtAB, cdtA, cdtC - variant が weak い な が ら も toxin activity を shown し た の に し seaborne て, cdtB - variant は toxin activity を shown さ な か っ た. Further に, the activity of this toxin に, three kinds of refined CdtA,CdtB,CdtC proteins are all てを and える とで とで and then reconstituted された. の results above, 1) CdtA と CdtC は 単 alone で CDT active を し, CdtB は CDT の active を raised strong す る こ と, 2) three の CdtA, CdtB, CdtC protein の み exist す れ ば, CDT activity は completely で あ る こ と が in stopping さ れ た.