ヒト血漿カリクレイン感受性蛋白質PK-120の機能解析

人血浆激肽释放酶敏感蛋白PK-120的功能分析

• 批准号: 07780503
• 负责人: 西村 仁
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07780503/
• 关键词: 血漿カリクレイン; ブラジキニン; 血小板凝集

(1)PK-120の血漿カリクレイン(PK)消化により生成する断片の血小板凝集に対する影響:PK-120をPKで限定分解後その消化物をFPLCを用いて分離し、70kDaOYOBI35KDa断片を得た。そこで血小板凝集測定系12PK-120およびこれらの断片を加え、血小板凝集におけるこれらの蛋白質の影響を調べた。その結果、PK-120と35kDa断片に血小板凝集阻害活性が見いだされた。さらにPK-120と35kDa断片の血小板凝集阻害における濃度依存性を調べた結果、35kDa断片がより強い阻害活性を持つことが判明した。(2)PK-120のPK消化により生成するペプチドの同定と機能解析:PK-120をPKで限定分解後その消化物を逆相HPLCを用いて分離し、アミノ酸分析でペプチドを幾つか同定した。そのうちの1つ(Pro^<634>-Arg^<660>)はC末端側3残基が生理活性ペプチドブラジキニンと同一であったため、このペプチドを化学合成した。そして得られたペプチドをFITCでラベル後血管内皮細胞や好中球、THP-1(単球系細胞)、U937(単球系細胞)に加え、これらの細胞に対する結合性を調べた。しかし、いずれの細胞においてもこのペプチドの結合性は見られなかった。また、これらの細胞にペプチドを加えたときの細胞応答(カルシウムイオン流入反応および活性酸素生成反応)を調べたが、有意な応答は見られなかった。

(1) PK-120's effect on plasma digestion and platelet aggregation: PK-1 The digested product after 20をPK was decomposed to a limited extent and separated by FPLC, and the 70kDa OYOBI35KDa fragment was obtained.そこでPlatelet aggregation assay system 12PK-120 およびこれらの片を加え, platelet aggregation におけるこれらのprotein のeffect をadjusted べた. As a result, PK-120 and the 35kDa fragment have platelet aggregation inhibiting activity. It was found out that the concentration dependence of PK-120 and the 35kDa fragment of PK-120 on platelet aggregation inhibition was adjusted and the inhibitory activity of the 35kDa fragment of PK-120 and 35kDa fragment was strong and the inhibitory activity was maintained. (2) PK-120のPK digestion and synthesis function analysis: PK-120をPKでThe decomposed digestate was analyzed by reverse-phase HPLC and separated by ammonia acid.そのうちの1つ(Pro^<634>-Arg^<660>)はC-terminal side 3 residues Physiologically active ペプチドブラジキニンと is the same as であったため and このペプチドを chemical synthesis した.そして得られたペプチドをFITCでラベル vascular endothelial cells, THP-1(単Spheroid cell line), U937 (spheroid cell line), U937 (spheroid cell line), U937 (spheroid cell line), U937 (spheroid cell line), and U937 (spheroid cell line) binding and binding.しかし, いずれのcell においてもこのペプチドの合性は见られなかった.また、これらのcell にペプチドを加えたときのcell応 Answer (カルシウムイオン流Into the anti-reflex および active acid to generate reactive を tune べたが, intentional な応respond は见られなかった.