ヒト血漿カリクレイン感受性蛋白質PK-120の機能解析

人血浆激肽释放酶敏感蛋白PK-120的功能分析

• 批准号: 07780503
• 负责人: 西村 仁
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07780503/
• 关键词: 血漿カリクレイン; ブラジキニン; 血小板凝集

(1)PK-120の血漿カリクレイン(PK)消化により生成する断片の血小板凝集に対する影響:PK-120をPKで限定分解後その消化物をFPLCを用いて分離し、70kDaOYOBI35KDa断片を得た。そこで血小板凝集測定系12PK-120およびこれらの断片を加え、血小板凝集におけるこれらの蛋白質の影響を調べた。その結果、PK-120と35kDa断片に血小板凝集阻害活性が見いだされた。さらにPK-120と35kDa断片の血小板凝集阻害における濃度依存性を調べた結果、35kDa断片がより強い阻害活性を持つことが判明した。(2)PK-120のPK消化により生成するペプチドの同定と機能解析:PK-120をPKで限定分解後その消化物を逆相HPLCを用いて分離し、アミノ酸分析でペプチドを幾つか同定した。そのうちの1つ(Pro^<634>-Arg^<660>)はC末端側3残基が生理活性ペプチドブラジキニンと同一であったため、このペプチドを化学合成した。そして得られたペプチドをFITCでラベル後血管内皮細胞や好中球、THP-1(単球系細胞)、U937(単球系細胞)に加え、これらの細胞に対する結合性を調べた。しかし、いずれの細胞においてもこのペプチドの結合性は見られなかった。また、これらの細胞にペプチドを加えたときの細胞応答(カルシウムイオン流入反応および活性酸素生成反応)を調べたが、有意な応答は見られなかった。

（1）PK-1220对血浆Kallikrein（PK）消化产生的片段的血小板聚集的影响：PK-1220与PK分解后，使用FPLC分离了消化物，以获得70kdaoyobi35kda片段。因此，添加了血小板聚集测定系统12pk-1220及其片段以研究这些蛋白质对血小板聚集的影响。结果，在PK-120和35 kDa片段中发现了血小板聚集抑制活性。此外，PK-1220和35KDA片段在抑制血小板聚集中的浓度依赖性表明35KDA片段具有更强的抑制活性。 （2）通过PK-1220的PK消化产生的肽的鉴定和功能分析：PK-120用PK降解后，使用反向的相HPLC分离了消化物，并通过氨基酸分析鉴定了几种肽。其中一个（pro^<634> -arg^<660>）具有与生物活性肽心动激素相同的三个C末端残基，因此该肽是化学合成的。然后将获得的肽添加到血管内皮细胞，中性粒细胞，THP-1（基于单核细胞的细胞）和U937（基于单核细胞的细胞）中，并检查与这些细胞的结合。但是，在任何一个细胞中均未观察到该肽的结合特性。此外，当研究对这些细胞的肽添加肽时，细胞反应（钙离子涌入和活性氧反应），但找不到明显的反应。