ヒト血漿カリクレイン感受性蛋白質PK-120の機能解析

人血浆激肽释放酶敏感蛋白PK-120的功能分析

• 批准号: 07780503
• 负责人: 西村 仁
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07780503/
• 关键词: 血漿カリクレイン; ブラジキニン; 血小板凝集

(1)PK-120の血漿カリクレイン(PK)消化により生成する断片の血小板凝集に対する影響:PK-120をPKで限定分解後その消化物をFPLCを用いて分離し、70kDaOYOBI35KDa断片を得た。そこで血小板凝集測定系12PK-120およびこれらの断片を加え、血小板凝集におけるこれらの蛋白質の影響を調べた。その結果、PK-120と35kDa断片に血小板凝集阻害活性が見いだされた。さらにPK-120と35kDa断片の血小板凝集阻害における濃度依存性を調べた結果、35kDa断片がより強い阻害活性を持つことが判明した。(2)PK-120のPK消化により生成するペプチドの同定と機能解析:PK-120をPKで限定分解後その消化物を逆相HPLCを用いて分離し、アミノ酸分析でペプチドを幾つか同定した。そのうちの1つ(Pro^<634>-Arg^<660>)はC末端側3残基が生理活性ペプチドブラジキニンと同一であったため、このペプチドを化学合成した。そして得られたペプチドをFITCでラベル後血管内皮細胞や好中球、THP-1(単球系細胞)、U937(単球系細胞)に加え、これらの細胞に対する結合性を調べた。しかし、いずれの細胞においてもこのペプチドの結合性は見られなかった。また、これらの細胞にペプチドを加えたときの細胞応答(カルシウムイオン流入反応および活性酸素生成反応)を調べたが、有意な応答は見られなかった。

(1) the PK - 120 plasma カ の リ ク レ イ ン (PK) digestion に よ り generated す る fragment の platelet aggregation に す seaborne る impact: PK - 120 を PK で qualified after decomposition そ の digest content を FPLC を with い て separation し, 70 た kdaoyobi35kda を fragment. そ こ で determination of platelet aggregation is 12 pk - 120 お よ び こ れ ら の fragment を え, platelet aggregation に お け る こ れ ら の protein の influence を adjustable べ た. Youdaoplaceholder0 そ results, PK-120と35kDa fragment に platelet agglutination inhibition activity が see だされた だされた. さ ら と 35 に PK - 120 kda fragment の platelet aggregation resistance against に お け る concentration dependence を adjustable べ た results, 35 kda fragment が よ り い strong resistance against active を hold つ こ と が.at し た. (2) the PK - 120 の PK digestion に よ り generated す る ペ プ チ ド の with fixed と function resolution: PK - 120 を PK で qualified after decomposition そ の digestion を reverse phase HPLC を content with い て separation し, ア ミ ノ acid analysis で ペ プ チ ド を several つ か be し た. そ の う ち の 1 つ (Pro ^ < 634 > - Arg ^ < 660 >) は C terminal side 3 residues が physiological activity ペ プ チ ド ブ ラ ジ キ ニ ン と same で あ っ た た め, こ の ペ プ チ ド を chemical synthesis し た. そ し て have ら れ た ペ プ チ ド を FITC で ラ ベ ル や good vascular endothelial cells after the ball, THP 1 (単 ball cells), U937 (単 ball cells) に え, こ れ ら の cells に す seaborne る associativity を adjustable べ た. The conjugations of った, ずれ, ずれ, にお cells, にお, て, て, <s:1>, ペプチド, ペプチド are found in られな, った, った. ま た, こ れ ら の cells に ペ プ チ ド を plus え た と き の cells 応 answer (カ ル シ ウ ム イ オ ン into reverse 応 お よ び active acid production 応) を adjustable べ た が, intentionally な 応 answer は see ら れ な か っ た.