ヒトIX因子(血友病B因子)のEGF様第1ドメイン内の新型糖鎖の機能解析

人因子IX（血友病因子B）类EGF第一结构域中新型糖链的功能分析

• 批准号: 06780474
• 负责人: 西村 仁
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06780474/
• 关键词: lX因子; EGF様第1ドメイン; セレクチンファミリー; Vllla因子; X因子

1.血小板糖蛋白質P-セレクチンとlXa因子の結合に対する糖鎖の影響:ヒトlX因子のEGF様第1メドイン内のSer-61に結合している糖鎖(NeuAcα2-6Galβ1-4GlcNAcβ1-3)の糖組成は、接着蛋白質であるセレクチンファミリーのリガンドとして知られるシアリル-Le^xやシリアル-Le^aと全く同一である。そこで、活性型ヒトlX因子(lXa因子)と血小板上に発現しているP-セレクチンとの結合性を調べた。まず、lXa因子に対してグリコシダーゼによる逐次分解を行い、Ser-61に結合している糖鎖を除去した。この糖鎖フリーのlXa因子及び対照のlXa因子をマイクロプレートにコートし、ヒト血小板より精製したP-セレクチンをCa^<2+>存在下でマイクロプレートに加えた。その結合量を抗ヒトP-セレクチンモノクローナル抗体を用いたELISA法で定量した結果、いずれのlXa因子もP-セレクチンとの有意な結合性は観察されなかった。2.lXa因子のX因子活性化に対する糖鎖の影響:lXa因子の補助因子であるVllla因子は、その分子内にガラクトースレクチンドメインを有しており、この糖鎖はVllla因子のリガンドとして働いている可能性が考えられる。そこで、上述のように糖鎖フリーのlXa因子及び対照のlXa因子調製し、それらをVllla因子の存在下X因子を活性化する再構成系に加え糖鎖の影響を調べた。その結果、いずれの場合もX因子は同程度活性化され糖鎖の影響はみられなかった。

1。糖剂对血小板糖蛋白P-选择蛋白和LXA因子结合的影响：糖组成（NeuACα2-6Galβ1-4GlCNACβ1-3）与人类LX因子的EGF类似于EGF的第一个Medoin在人类LX因子中与Ser-61结合的糖成分与Ser-61完全相同，与lig lig lig sial-leg sial-le-le-le-le-le-le-lel-lel-lel-lel-lel-lel-lel-lel-lel-lel-lel-lel-^x x x x x x x x x x x of^x x x x x of家族，是粘附蛋白。因此，检查了在血小板上表达的活性人Lx因子（LXA因子）的结合特性。首先，因糖苷酶顺序分解因子LXA以去除与Ser-61结合的糖链。将无糖的LXA因子和对照LXA因子涂在微板上，并在Ca^<2+>的情况下将从人血小板纯化的P-选择素添加到微孔板上。使用抗人类P-选择素单克隆抗体通过ELISA方法对结合量进行了定量，并且任何LXA因子与P-选择蛋白的任何LXA因子均未显着结合。 2。聚糖对因子X激活的影响：因子LXA的辅因子因子VLLLA具有半乳糖凝集素结构域内的分子内，并且该聚糖可能充当因子Vllla的配体。因此，如上所述，制备了无糖的LXA因子和对照LXA因子，并且在存在VLLLA因子的情况下重组了这些因子，除了在存在VLLLA因子的情况下激活因子X的重构系统外，还研究了糖链的影响。结果，在任何一种情况下，都没有观察到糖的作用。