ヒトIX因子(血友病B因子)のEGF様第1ドメイン内の新型糖鎖の機能解析

人因子IX（血友病因子B）类EGF第一结构域中新型糖链的功能分析

• 批准号: 06780474
• 负责人: 西村 仁
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06780474/
• 关键词: lX因子; EGF様第1ドメイン; セレクチンファミリー; Vllla因子; X因子

1.血小板糖蛋白質P-セレクチンとlXa因子の結合に対する糖鎖の影響:ヒトlX因子のEGF様第1メドイン内のSer-61に結合している糖鎖(NeuAcα2-6Galβ1-4GlcNAcβ1-3)の糖組成は、接着蛋白質であるセレクチンファミリーのリガンドとして知られるシアリル-Le^xやシリアル-Le^aと全く同一である。そこで、活性型ヒトlX因子(lXa因子)と血小板上に発現しているP-セレクチンとの結合性を調べた。まず、lXa因子に対してグリコシダーゼによる逐次分解を行い、Ser-61に結合している糖鎖を除去した。この糖鎖フリーのlXa因子及び対照のlXa因子をマイクロプレートにコートし、ヒト血小板より精製したP-セレクチンをCa^<2+>存在下でマイクロプレートに加えた。その結合量を抗ヒトP-セレクチンモノクローナル抗体を用いたELISA法で定量した結果、いずれのlXa因子もP-セレクチンとの有意な結合性は観察されなかった。2.lXa因子のX因子活性化に対する糖鎖の影響:lXa因子の補助因子であるVllla因子は、その分子内にガラクトースレクチンドメインを有しており、この糖鎖はVllla因子のリガンドとして働いている可能性が考えられる。そこで、上述のように糖鎖フリーのlXa因子及び対照のlXa因子調製し、それらをVllla因子の存在下X因子を活性化する再構成系に加え糖鎖の影響を調べた。その結果、いずれの場合もX因子は同程度活性化され糖鎖の影響はみられなかった。

1. Platelet glycoprotein P-protein binding to factor lXa affects glyco-lock: Ser-61 binding to factor lX in EGF sequence 1. Glyco-lock (NeuAcα2-6Galβ1- 4 GlcNAc β1-3) has a carbohydrate composition that is identical to that of protein. The binding of P-protein to platelet protein is regulated by the activation of factor lX (factor lXa). As a result, the sugar lock associated with Ser-61 is removed during the progressive decomposition of factor lXa. In the presence of Ca^<2+>, the sugar chain factor lXa and the corresponding factor lXa are added to the protein. The binding amount of the anti-Xa P-protein was quantified by ELISA, and the intentional binding of the anti-Xa P-protein was observed. 2. The effect of factor X activation on glycogen lock: factor Xa co-factor and factor Vllla may be involved in the development of factor Vllla. In addition, factor X is activated in the presence of factor Vllla, which modulates the effect of factor Vllla on the recombination of factor X. The X factor is activated to the same extent as the sugar lock.