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証明困難な体液における新規体液識別法の応用とダイレクト法への展開

体液鉴定新方法在难以证明的体液中的应用及向直接法的发展

基本信息

批准号：
15H00672
负责人：
佐藤哲也
金额：
$ 0.32万
依托单位：
熊本県警察本部刑事部科学捜査研究所
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
财政年份：
2015
资助国家：
日本
起止时间：
2015 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15H00672/
关键词：
体液識別 RT-LAMP法ダイレクトRT-LAMP法

项目摘要

1. 研究目的mRNAを指標とした体液識別法は、検査法の一元化や高い検出感度を達成できることから、法科学鑑定において利用価値が高いと考えられており、迅速性や簡便性、検出感度の更なる向上が望まれている。これまでに、mRNAの迅速・簡便な検出法としてRT-LAMP法に着目し、体液識別に応用可能か検討を行った。その結果、血液、精液、唾液において有効であった。そこで本研究では、証明が難しいとされている尿、膣液において、本検査法が有効であるか検討を行った。また、RNA抽出を必要としないダイレクト法についても応用可能か検討を行った。2. 研究方法尿、膣液の検出については、尿はuromodulin(UMOD)、膣液はestrogen receptor I (ESRI)を標的とし、プライマーを設計した。各体液からtotal RNAを抽出し、Loopamp RNA 増幅試薬キット(栄研化学)を用いて増幅した。増幅の検出は。蛍光試薬を加えて目視で行った。ダイレクト法は、血液をそのまま反応液に加えて増幅・検出を行った。なお、本研究は日本法科学技術学会倫理審査委員会の承認を得て実施した。3. 研究成果設計したプライマーを用いて増幅を行ったところ、各mRNAに特異的な増幅が見られた。1時間以内の反応で、UMODは尿、ESRIは膣液で蛍光を示した。検出感度は、尿は3ml、膣液は0.3μl相当まで検出することができた。以上の結果から、RT-LAMP法は尿、膣液においても有効であることが考えられた。また、血液のダイレクト法検出においては、RNA抽出を行わなくても増幅が見られ、0.5pl相当まで検出することができ、本検出法は、ダイレクト法にも応用可能であることが示唆された。

1. Objective: mRNA index and humoral identification method are unified, high detection sensitivity is achieved, scientific identification method is used, high detection sensitivity is achieved, rapidity and simplicity are achieved, detection sensitivity is improved. The RT-LAMP method is a rapid and simple method for detecting mRNA, and it can be used for detecting and identifying body fluids. The results, blood, semen, saliva, etc. This study proves that there is a problem with urine and urine. RNA extraction is necessary and the method of RNA extraction is possible. 2. Methods: Urine, urine, uromodulin(UMD) and urine estrogen receptor I (ESRI) were designed. Total RNA extracted from each body fluid, Loopamp RNA amplification test, Increase in amplitude and output. The light test is added to the visual test. The method of blood purification This study was approved by the Ethics Review Committee of the Japanese Society of Law Science and Technology. 3. The results of the study are as follows: 1. The light of the liquid is reflected in the time limit of UMOD. Detection sensitivity: 3ml of urine, 0.3μl of liquid. The above results show that RT-LAMP method has a negative effect on urine and urine. This method is available in the form of a blood sample, a RNA sample, and a 0.5pl sample.