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毛根を用いた先天性皮膚疾患の遺伝子解析法の開発

利用发根开发先天性皮肤病遗传分析方法

基本信息

批准号：
21931014
负责人：
小西弘江
金额：
$ 0.38万
依托单位：
Hyogo College of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-21931014/
关键词：
DNAマイクロアレイ毛根

项目摘要

文書により研究同意を得た健常人ボランティアより毛根を20本程度採取して、total RNAを抽出した。精製後、マイクロチップ電気泳動システム(コスモアイ)を用いてRNAの分解がないことを確認後、逆転写反応とCy3標識反応を行い、試料に含まれる全てのmRNAからCy3標識されたアミノアリルaRNAを増幅・合成した。この増幅産物をDNAマイクロアレイチップをもちいて、ハイブリダイゼーションをおこない、毛根に発現する遺伝子のスクリーニングを行った。スクリーニングの結果、ケラチン17、ケラチン10、トランスグルタミナーゼ1、SPINK5等の遺伝性皮膚疾患の原因遺伝子の発現が確認された。しかし、ケラチン1など発現が確認されない遺伝性皮膚疾患関連遺伝子も存在した。文書により研究同意を得た健常人ボランティアの毛根より、total RNAを抽出し、high fidelityのポリメラーゼを用いたRT-PCRを種々の条件のもとでおこなった。その結果、翻訳領域を全て含んだケラチン17、ケラチン10、トランスグルタミナーゼ1、SPINK5のcDNAを増幅することができた。このPCR産物はシーケンスすることにより目的とする遺伝子が増幅されていることを確認した。これらのプロトコールは今後の臨床における先天性皮膚疾患の確定診断に役立てていく予定である。一連の実験により、ケラチン17、ケラチン10、トランスグルタミナーゼ1、SPINK5は毛根をもちいた遺伝子解析が確定診断に使用できることが分かった。

The document was approved by the Ministry of Health. After purification, after confirming that the decomposition of RNA can be achieved by using the Makrokepi electrophoresis system (Sonoma), reverse transcription and Cy3 labeling were carried out, and the complete mRNA containing the Cy3 labeling was amplified and synthesized from the sample. This is the first time that the DNA of a plant has been detected. The results of the test, test 17, test 10, test 1, SPINK5 and other causes of genetic skin disorders have been confirmed. The presence of a gene associated with a genetic skin disorder has been confirmed. The results of this study were as follows: The results of this study include: cDNA amplification of SPINK5; cDNA amplification of SPINK17; cDNA amplification of SPINK10; cDNA amplification of SPINK5; and cDNA amplification of SPINK5. The PCR product was identified as a target gene. The diagnosis of congenital skin diseases is determined in the future. A series of