びまん性肺疾患患者における気管支肺胞洗浄液中シアリダーゼの解析

弥漫性肺疾病患者支气管肺泡灌洗液唾液酸酶分析

• 批准号: 23931023
• 负责人: 平 千明
• 金额: $ 0.38万
• 依托单位: Shinshu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2011
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2011 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-23931023/
• 关键词: シアリダーゼ; 気管支肺胞洗浄液; マクロファージ

間質性肺炎の機序解明を目的とし、ヒト由来シアリダーゼに着目し、気管支肺胞洗浄液(BALF)中の大半を占めるマクロファージMΦ細胞内及び細胞表面に存在するシアリダーゼの機能について解析を行った。1.BALF中のシアリダーゼ発現量の比較肺疾患患者6例のBALF中のCD14陽性細胞とCD3陽性細胞を分離後、RNA抽出およびcDNA合成を行い、Real-time PCRを用いてNeu1とNeu3のシアリダーゼ発現(2^<-ΔC>)を定量した。CD14陽性細胞におけるNeu1発現は6症例で3.80×10^<-2>～2.65×10^<-1>(平均5.21×10^<-2>)であったが、Neu3は0～10^<-4>とNeu1よりも低く、症例により様々であった。CD3陽性細胞では、6症例中3例でのみ発現が認められ、Neu3よりもNeu1の発現が高値であった。正常末梢血のCD14陽性細胞では、肺疾患患者と同様、Neu1の方がNeu3よりも高値を示した。末梢血CD3陽性細胞については、細胞数が微量であったため解析できなかった。2.培養細胞を使用したシアリダーゼの性状解析ヒト由来Neu1のリコンビナントを作成し、ウェスタンブロットで存在を確認した。3.MΦ内シアリダーゼ局在変化の解析BALF中の、MΦ、およびリンパ球と好中球について、抗Neu1抗体と細胞骨格を染める抗β-actin抗体を用いた免疫染色(共染色)を行い、レーザー共焦点顕微鏡でNeu1の局在を観察した。3種全ての細胞表面および細胞内でNeu1の存在が観察された。特にMΦでは、β-actinで構成された突起状の構造物上にNeu1が存在しており、さらに突起の先端や細胞表面から顆粒状に突出した状態のNeu1が観察された。また、Neu1の染色性の強弱も、MΦ毎に異なるのが観察された。

The mechanism of interstitial pneumonia is explained in detail. The origin of interstitial pneumonia is related to the function of interstitial pneumonia in lung lavage fluid (BALF). 1. Comparison of CD14-and CD3-positive cells in BALF from 6 patients with lung diseases. RNA extraction and cDNA synthesis were performed. Real-time PCR was used to quantify the expression of Neu1 and Neu3 in BALF. CD14-positive Neu1 cells were detected in 6 cases (3.80×10^<-2>~2.65×10^<-1>, mean 5.21×10^<-2>), Neu3 was 0~10^<-4>, Neu1 was low, and Neu1 was low in 6 cases. CD3 positive cells were detected in 3 of the 6 cases. Neu3 positive cells were detected in 3 of the 6 cases. CD14 positive cells in normal peripheral blood were similar to those in patients with lung disease, and Neu1 positive cells were higher than those in patients with lung disease. CD3 positive cells in peripheral blood were detected and the number of cells was analyzed. 2. Culture of cells to use the characteristics of the analysis of the origin of the Neu1 to create a network, it is necessary to confirm the existence of network 3. M Φ-β-actin antibody was detected by immunostaining and confocal microscopy in BALF. The presence of Neu1 on the cell surface and in the cell was observed. In particular, the presence of Neu1 on the protuberant structures formed by MΦ and β-actin was observed on the protuberant and granular surfaces of the cells. The staining intensity of Neu1 and MΦ were observed.