LC-MS/MSを用いたリウマチ治療に用いる抗体医薬品の血中濃度測定法の確立

LC-MS/MS风湿治疗用抗体药物血药浓度测定方法的建立

• 批准号: 24926013
• 负责人: 中村 浩規
• 金额: $ 0.38万
• 依托单位: Gunma University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Scientists
• 财政年份: 2012
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2012 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-24926013/
• 关键词: Infliximab; LC-MS/MS; 血中濃度測定

本申請研究では、関節リウマチ患者やクローン病患者などに対して用いられる抗体医薬品インフリキシマブ(IFX)の血中濃度測定による薬物動態解析や、IFXに対する抗体(抗IFX抗体)の発現機序解明のための重要なツールとなりうる"LC-MS/MS法を用いたIFXおよび抗IFX抗体の濃度測定法の確立"を目的として検討を行った。第一に、IFXおよびヒト血液中のタンパク質をタンパク分解酵素により断片化しSDS-PAGE法を用いて未処理のIFXやヒト血液中のタンパク質と分子量を比較することで最も消化効率の良い前処理条件を検討した。第二に、得られたサンプルをLC-MS/MSで分析し、主成分解析(PCA解析)を行うことでIFX特有のイオンピークを複数種類抽出した。これらのピークのうち、比較的強いピーク強度を有し、なおかつIFXを含むサンプルに特異的に存在するピークを選択してIFXの濃度測定を行った。その結果、前処理条件としてはジチオスレイトールによる還元処理、ヨードアセトアミドによるアセチル化処理およびトリプシンによるタンパク断片化としてについて最適な前処理条件を設定することが出来た。次に、PCA解析によって得られた複数種類のIFX特異的なピークのうちで最も強度が強かったイオンピークについてproductionの探索を行った結果、最も特異的かつ強度の強いイオンピークを得ることが出来た。そしてブランク血清にIFXを添加したサンプルを測定した結果、絶対検量線法ではあるがこれまで報告されているIFXの血中濃度範囲におけるリニアな検量線を得ることが出来た。現在は、固相抽出によるイオンサプレッションの軽減やサンプルの濃縮などによる感度向上を目的とした検討を行っている。

In this application, we applied for the determination of the concentration of antigens in the blood of the patients who were sick, the patients, the patients, the The IFX antibody (anti-IFX antibody) was confirmed by the LC-MS/MS method. The IFX antibody (anti-IFX antibody) assay was confirmed. The first step is to determine the optimal digestion rate, the best digestion rate, and the optimal digestion rate. The SDS-PAGE method was used to determine the molecular weight of IFX in blood. Second, to extract data such as LC-MS/MS analysis, principal component analysis (PCA analysis), IFX-specific data, complex data, etc. There is a difference between the strength of the IFX, the strength of the IFX, the strength of the test, the strength of the strength, the strength of the test, the strength of the test, the strength of the test. The results, the previous conditions, the data, the results, the previous conditions, the results, the previous conditions, the parameters, the parameters, the results, the previous conditions, the parameters, the parameters, the results, the previous conditions, the results, the results, In the second part, the PCA analysis results show that there is a significant difference in the performance of the IFX specialty. the results of the production search results, the most specific strength, the most important results, the most important results. The serum IFX was used to determine the results of the measurement, and the dosimetry was used to determine the results of the report. the concentration range in the blood was significantly higher than that in the blood, and the temperature range in the blood was significantly higher than that in the blood. Now that the solid phase is extracted, it is necessary to increase the sensitivity of the solid phase.