ＩＦＸ投与患者における薬剤抵抗性の発現と血中ＭＴＸ濃度の関係

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本申請課題では、メトトレキサート(MTX)の血中濃度の個人差が抗インフリキシマブ(IFX)抗体発現の個人差に影響している可能性を考え、IFXによる治療を受けている関節リウマチ患者における抗IFX抗体発現に対するMTXの効果を評価することを目的として、“IFX投与患者における薬剤抵抗性の発現と血中MTX濃度の関係”について検討した。まずIFXについては、IFXおよびヒト血液中のタンパク質をタンパク分解酵素により断片化し、得られたサンプルをLC-MSで分析し、主成分解析(PCA解析)を行うことでIFX特有のイオンピークを複数種類抽出した。これらのピークのうち、比較的強いピーク強度を有し、なおかつIFXを含むサンプルに特異的に存在するピークをPrecursorionとして選択し、LC-MS/MSを用いた測定によりProductionを同定した。これらのPrecursorionとProductionを組み合わせて測定することにより、高感度かつ特異的なIFXの濃度測定の確立を行った。一方MTXについても、LC-MS/MSを用いた高感度測定の確立を行った。本研究で確立した測定法を用いて、ブランク血清にIFXを添加したサンプルを測定した結果、絶対検量線法ではあるがこれまで報告されているIFXの血中濃度範囲におけるリニアな検量線を得ることが出来た。一方MTXにおいても、蛍光偏光免役測定法を用いた既存の測定法に比べ、より高感度かつリニアな検量線を得ることが出来た。現在は、患者血清の前処理および濃縮のための固相抽出法による精製を用いることで、さらなる高感度測定に向けた検討を行っている。条件が確立され次第、患者検体の測定を行っていく。