ヒトES細胞由来肝細胞を用いた薬物代謝酵素誘導評価系の確立

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【方法】ヒトES細胞の肝細胞への分化誘導はActivin A、Wnt3aなどの分化誘導因子を加え、22日間培養することによって行った(その結果出来た細胞を以下、ヒトES細胞由来肝細胞、とする)。肝細胞への分化の程度は形態学的変化の推移や、インドシアニングリーン(ICG)染色の他、アルブミン(ALB)、薬物代謝酵素CYP1A2、CYP3A4等のmRNA発現量をリアルタイムPCR法にて測定することにより評価した。また、ヒトES細胞由来肝細胞にCYP1Aの誘導剤であるオメプラゾール(OME)や3-メチルコラントレン(3-MC)、CYP3Aの誘導剤であるリファンピシン(RIF)を加え、その72時間後にCYP1A1、CYP1A2、CYP3A4のmRNAレベル、代謝酵素活性を測定し、ヒトES細胞由来肝細胞のmRNAレベル、代謝酵素活性の、誘導剤による変化を検討した。【結果】形態学的な変化やICG染色を行った結果から、ある程度肝細胞に近い細胞になっている可能性が考えられた。また、ヒトES細胞由来肝細胞からはALB、CYP1A2、CYP3A4などのmRNA発現が確認された。しかし、CYP1A2やCYP3A4の発現量はヒト成人肝細胞の発現パターンよりも、ヒト胎児肝細胞の発現パターンに類似していた。また、CYP1A1、CYP1A2のmRNA発現量はOME、3-MC処理により有意な上昇が認められた。さらにCYP1Aの代謝酵素活性もOME、3-MC処理によって有意な上昇が認められた。一方、RIFを処理することによって、CYP3A4のmRNAや代謝酵素活性の上昇は認められなかった。これらの結果から、ヒトES細胞由来肝細胞は、CYP1Aの誘導剤評価系として使用可能であることが示唆された。今後成人肝細胞に近い細胞にするための効率的な分化培養条件や他の薬物代謝酵素誘導も検出できるように検討する必要がある。