薬剤耐性Ｓｍａｌｌ－Ｃｏｌｏｎｙ　Ｖａｒｉａｎｔｓ判定用培地の検討

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本研究では、臨床材料から分離したSmall-Colony Variantsを対象に、①16S rRNA遺伝子解析による菌種同定、②栄養要求性試験、③特異的プライマーを用いた耐性遺伝子の検出、④SCVsの発育を支持する各種栄養素を各種薬剤耐性菌スクリーニング培地に添加し、その培地を用いた薬剤感受性試験を行うことで③に挙げた耐性遺伝子を保有するSCVsが薬剤耐性菌として判断できるか否かの評価を行った。臨床分離株SCVs 45株を対象に①分子生物学的手法による菌種同定、②栄養要求性試験を行ったところ、13株がStaphylococcus aureusチミジン依存性SCVs(Thymidine dependent SCVs : TD-SCVs)であった。そのうち、同一患者由来株を除いた計10株ついて③特異的プライマーを用いた薬剤耐性遺伝子(mecA)の検索を行ったところ、4株がmecAを保有していた。培地に添加するチミジン濃度を決定するため行った増殖曲線分析では、S. aureus TD-SCVs 10株はいずれも10μg/mLのチミジン濃度で最大の発育を示した。mecAを保有するS. aureus TD-SCVs(MRSA TD-SCVs)を検出できなかったMRSAスクリーニング検査用の4種類の培地 : MS-CFX寒天培地(ニッスイ)、BDクロムアガーMRSA Ⅱ寒天培地(BD)、クロモアガーMRSA(関東化学)、MDRS Ⅱ寒天培地(極東製薬)について、④チミジンをおよそ10μg/mLとなるように各培地に添加した結果、すべてのMRSA TD-SCVsが検出可能となった。これまでMRSAスクリーニング培地に発育不良により検出できなかったMRSA TD-SCVsは、培地に10μg/mLのチミジンを添加することによって検出可能であることが示された。