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ダイレクトシークエンスおよびサブクローニングによる血液型遺伝子型の解析

通过直接测序和亚克隆分析血型基因型

基本信息

批准号：
08770303
负责人：
那谷雅之
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770303/
关键词：
ABO式血液型 PCR direct sequence subcloning Dye terminator法 Dye primer法 C8 Duffy

项目摘要

ABO式血液型を決定する糖転移酵素cDNAの261番・297番および703番を含む領域を増幅した.PCR産物のdirect sequencingをDye terminator法とDye primer法を用いて行った.261番においてAA, BB, AB型では単一のGのピークが,00型では完全な欠失が確認された.AO, BO型ではGのピークが重複して観察された.AO, BO型においてはDye primer法の方がDye terminator法よりも正確に判定することができた.297番においてはYamamoto et al.が報告した塩基置換(A遺伝子ではA, B遺伝子ではG)も確認された.また,この部位における塩基置換によりO型をO^AO^A, O^GO^G, O^AO^Gの3種に分けることができた.703番においてはDye terminator法,Dye primer法の両者でAA, AO, OO型では単一のGのピークが,AB, BO型ではGとAのピークが重複して,BB型では単一のAのピークが検出され,容易に判定することができた.現在,AO, BOが容易に識別できるようにprimerの位置を変更するとともに,526番・703番・796番についても検討を続けている.次にPCR産物のpT7Blue T-Vectorヘサブクローニング後のsequencingを試みた.複数個のコロニーを拾い,sequencingを行った所,homozygote, heterozygoteともに正確に型判定が可能であり,混合体液斑痕に有用である可能性が示唆された.ABO式以外にC8型,Duffy型についてPCR-direct sequencingによるタイピングを行ったところ,型判定が容易に可能であった.また,PCR産物のSSCP解析を試みたところ,型判定が可能であった.現在はMN式,GC型のPCR-direct sequencingによるタイピングを検討している.

ABO-type blood type determination of sugar transfer enzyme cDNA 261, 297, 703, including the field of amplification.PCR product direct sequencing Dye terminator method and Dye primer method were used in the middle of the test. 261, AA, BB, AB type is only one G, 00 type is completely unconfirmed.AO, BO type is only one G, repeat detection.AO, BO type BO type Dye primer method and method Dye terminator method are used to determine the correct position. Yamamoto et al. report base substitution (A gene is A gene, B gene is G gene). In addition, there are three types of base substitutions in this site: O^AO^A, O^GO^G, O^AO^G. Type AA, AO, OO is a G,AB, BO is a G, A,BB is a A, BB is easy to identify. Now,AO, BO are easy to identify, and the position of the primer can be changed from 526 to 703 to 796. The pT7Blue T-Vector of PCR product was used for sequencing. A plurality of PCR-direct sequencing,homozygote, heterozygote, etc. may be used to determine the correct type, and the possibility of using mixed body fluid stains may be indicated. C8 type,Duffy type, etc. may be used to determine the correct type. SSCP analysis of PCR products was performed and type determination was possible. PCR-direct sequencing of MN and GC types is now discussed.