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蛍光色素標識塩基配列決定法の法医学的応用

荧光染料标记碱基测序的法医应用

基本信息

批准号：
05770293
负责人：
那谷雅之
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05770293/
关键词：
塩基配列決定蛍光色素 PCR STR dye terminator dye primer

项目摘要

蛍光色素標識塩基配列決定法の法医学的応用について以下の検討を行った。1)4塩基対STR部位について塩基配列決定法による正確なサイズ測定法を試みた。多型性領域として既に報告のあるACTBP2,HUMTHO1(TC11),D11S488の3領域について検討した。各領域を増幅する2つのプライマーの5′末端部にそれぞれ-21M13配列とM13 reverse配列をつけたプライマーを作製しPCRを行った。PCR増幅産物をポリアクリルアミドゲル電気泳動にて分離後、切り出した。精製後、PCR増幅産物をtemplateとしてdye terwminator法により蛍光色素標識し、sequencerにて塩基配列を決定した。この方法によって得られた増幅産物のサイズはポリアクリルアミドゲル泳動後、銀染色によって検出したサイズとよく一致していた。2)MCT118(D1S80)領域について塩基配列決定によるサイズ測定を試みた。MCT118の増幅産物は4塩基対STR部位に比べ、サイズが大きいためdye terminator法よりdye pri-mer法の方が優れていた。また、繰返し回数の多いalleleでは完全な塩基配列を得ることができない場合もあった。蛍光色素標識塩基配列決定法による短fragment(microsatellite等)のサイズ決定は非常に正確であり、法医学領域においても有用であると考えられる。またdye terminator法には多検体を同時に処理できる利点もある。欠点としては通常のサイズ決定法に比し、手順が多いことと長いfragmentの解析が困難であることであるが、fragment自動解析ソフトウェアの使用によって、今後はこの欠点も克服できると考えられる。

Forensic application of the method for determining the base alignment of fluorescent pigments 1)4. The STR site is located in the middle of the base alignment determination method, and the correct determination method is tried. Polymorphic domains are reported in ACTBP2,HUMTHO1(TC11),D11S488 and 3 domains. Each field is amplified by PCR at the 5′ end of the 2 ′-position and M13 reverse positions. PCR amplification products are separated and isolated by electrophoresis. After purification, PCR amplification products were template and dye terwminator method to determine the sequence of fluorescent pigment. The method is to obtain the product of silver staining. 2)MCT118(D1S80) Field test for base alignment determination MCT118's amplitude-increasing products are optimized by the dye terminator method and the dye primer method. The number of times the number of times The method of determining the base alignment of pigment identification is very accurate and useful in the field of forensic science. The dye terminator method is used to process multiple components simultaneously. The method of determining the default point is more difficult than the method of determining the default point, and the method of determining the default point is more difficult than the method of determining the default point.