PCR-SSCP法を用いた薬剤耐性結核菌の早期同定に関する研究
PCR-SSCP法早期鉴定耐药结核杆菌的研究
基本信息
- 批准号:08770442
- 负责人:
- 金额:$ 0.51万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
- 财政年份:1996
- 资助国家:日本
- 起止时间:1996 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
平成8年6月より10月の期間に当院結核病棟に入院した肺結核患者のうち,入院時に喀痰,あるいは気管支鏡にて気管支洗浄液を採取し,通常の方法にて培養陽性を示した20例を対象とし,このコロニーより同定,DNAの抽出,薬剤耐性検査を行った.DNAは,Woodsらにより提唱されたfreeze-boiling techniqueを用い結核菌の細胞壁,細胞膜を壊しそのままPCR(plymerase chain reaction)を行ったものの良好なPCRの結果が得られず,今回は菌体1白金耳を採取しアセトン処理後,preteinaseKにて消化後,10%SDSにて処理,フェノール,クロロホルムにて結核菌のDNAの抽出を行った.本年度はrpoB,inhA,pncA遺伝子についてPCRに用いるプライマーを作製した.rpoB,inhA遺伝子についてはPCR-SSCP法を行った.得られたPCR産物は非変性ポリアクリルアミドゲルにて泳動を行い,その後,銀染色を行い,バンドを検出した.しかしこの方法にて泳動度に変化を認めた検体は認められなかった.PCR-SSCP法で異常なバンドを検出するには,泳動温度が最も重要な要素であり,今後の検討が望まれた.一方pncA遺伝子の点突然変異については,5症例につきThe GATC1500Direct Blotting Electrophoresis Systemを用いてPCR産物を直接,非放射線標識のDideoxy法にて塩基配列を決定した.その結果,5症例においては点突然変異は認められなかったものの良好な泳動像が得られており,今後はrpoB,inhA遺伝子についてもPCR-SSCP法よりも,PCR-direct-sequence法にて検討を行っていきたいと考えている.
During the period from June to October in Pingcheng 8 years, the patients with lung disease who were admitted to the hospital had symptoms, and sputum was detected when they were admitted to the hospital. the washing fluid was collected from the bronchoalveolar lavage tube. Usually, 20 cases were diagnosed by clinical test, the results were the same, DNA was extracted, and the endurance test was performed. Woods yeast freeze-boiling technique was used to detect the cell wall and membrane membrane of Sclerotinia sclerotiorum. Good PCR results were obtained by plymerase chain reaction. This time, after the fungus 1 platinum fungus was collected and digested, the 10%SDS was digested, and the DNA was extracted from the cell. In this year's rpoB,inhA,pncA, the PCR-SSCP method will be used in the PCR-SSCP method. This year, the PCR-SSCP method will be used for the purpose of this year. It is necessary to apply the PCR product to the swimming trade. After that, the dye line will be dyed and the product will be released. The temperature of swimming is the most important factor in the temperature of swimming, and the temperature of swimming is the most important factor. In the future, the temperature of swimming is the most important factor, and the temperature of swimming is the most important factor. On one side of the pncA, all of a sudden, there was a lot of trouble. In 5 cases, the The GATC1500Direct Blotting Electrophoresis System was directly identified by the PCR object, and the Dideoxy method was used to determine the basis of the decision. The results showed that in 5 cases, all of a sudden, there was a good swimming performance in 5 cases. In the future, the rpoB,inhA method was tested by the PCR-SSCP method, and the PCR-direct-sequence method was tested by the PCR-direct-sequence method.
项目成果
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专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
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