ヒト血中におけるIGF-IN端分解酵素活性の臨床的意義について

人血中IGF-IN末端酶活性的临床意义

• 批准号: 08770821
• 负责人: 山本 裕之
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Shimane Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08770821/
• 关键词: IGF-I; des(1-3)IGF-I; protease; IGF binding protein; characterization; age; cloumn chromatography

われわれは既にラット血中および組織液中にIGF-Iから、IFG結合蛋白(IGFBP)に対する結合親和性が低いためintact IGF-Iに比し生物活性の高いdes(1-3)IGF-Iを生じる蛋白分解酵素(N端IGF-Iプロテアーゼ)の存在することを報告し、プロテアーゼ活性測定法を開発した。今回の研究では、ヒト血中N端IGF-Iプロテアーゼ活性について、測定法の再現性、時間・温度・pH依存性、分子量、加齢による影響、急激な血糖値の変化による影響の検討を行った。測定法は既報(Endocrinology135:2432-2440,1994)に従い、ほぼ良好な再現性が得られた(intraassayのCV値6.5-15.0%、interassayのCV値5.2-12.1%)。ヒト血中N端IGF-Iプロテアーゼ活性の性質は、時間、温度(至適;37℃)、pH(至適;5-6)依存性を示し、これらの性質はラットのプロテアーゼ活性と類似していた。ヒト血清をSephacryl S-200カラムでゲル濾過した場合のプロテアーゼ活性は、分子量30-50kDaに相当する分画に認められた。健常成人において、血中N端IGF-Iプロテアーゼ活性は加齢に伴い減少し(y=-0.209x+52.2,r=0.276,p<0.01;N=83)、血中総IGF-Iレベルと正の相関(y=0.076x+32.6,r=0.369,p<0.001;N=81)を示した。またヒト血中N端プロテアーゼ活性はインスリン低血糖により低下したが、ブドウ糖経口投与では変化しなかった。さらに^<125>I標識IGF-Iと^<125>I標識des(1-3)IGF-Iをヒトならびにラット血清とインキュベート後に、IFGBPに対する結合親和性をカラムクロマトグラフィーを用いて比較検討した結果、ヒト血中のIGFBPはdes(1-3)IGF-Iに対して、ラットより高い親和性を有し、50kDaのIGF-IGFBP complexを形成することが明らかになった。これらの成績は、ヒト血中にはN端IGF-Iプロテアーゼにより切断されたdes(1-3)IGF-Iがラット血中より高率に存在する可能性を示唆する。ヒト血中においてdes(1-3)IGF-IがIGF-Iの作用に与える影響については、今後さらに検討を要する。

我们已经报道说，IGF-I（N末端IGF-I蛋白酶）来自IGF-I在大鼠血液和组织液中存在的IGF-I（1-3）IGF-I产生的IGF-I（1-3）IGF-I比完整的IGF-I具有更高的生物学活性，这是由于其对IFG结合蛋白（IgFBP）的结合亲和力低的亲和力（IGFBP）的低结合（IGFBP）而开发了一种方法。在这项研究中，我们研究了测量方法，时间，温度和pH依赖性，分子量，衰老的影响以及血糖水平突然变化的影响的可重复性。先前报道了该测量方法（内分泌学135：2432-2440，1994），并且获得了几乎良好的可重复性（CV值6.5-15.0％，Interassay 5.2-12.1％的CV值）。 N末端IGF-I蛋白酶在人体血液中的特性是时间，温度（最佳； 37°C）和pH（最佳; 5-6）依赖性，这些特性与大鼠的蛋白酶活性相似。当人血清通过Sephacryl S-200柱过滤时蛋白酶活性在对应于30-50 kDa的分子量的馏分中观察到。在健康的成年人中，血液N末端IGF-1蛋白酶的活性随着年龄的增长而降低（y = -0.209x+52.2，r = 0.276，p <0.01; n = 83），显示与总血液IGF-I水平正相关（y = 0.076x+32.6，r = 0.369，r = 0.369，p <0.001）；此外，尽管由于胰岛素低血糖，N末端蛋白酶在人体血液中的活性降低了，但口服葡萄糖给药并未改变。 Furthermore, after incubating ^<125>I-labeled IGF-I and ^<125>I-labeled des(1-3)IGF-I with human and rat serum, the binding affinity for IFGBP was compared using column chromatography, and it was revealed that IGFBP in human blood had a higher affinity for des(1-3)IGF-I than rats, forming an IGF-IGFBP 复杂的。这些结果表明，由N末端IGF-I蛋白酶裂解的DES（1-3）IGF-I可能以比大鼠血液更高的人体血液中存在。 DES（1-3）IGF-I对IGF-I对人体血液的影响的影响将来需要进一步考虑。