II型糖尿病モデル’OLETFラット’における肥満関連遺伝子の同定

II型糖尿病模型“OLETF大鼠”肥胖相关基因的鉴定

• 批准号: 10770570
• 负责人: 山本 裕之
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Shimane Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-10770570/
• 关键词: 肥満関連遺伝子; OLETFラット; 視床下部; differetial display analysis

近年視床下部において摂食調節や肥満発症に関連したいくつかの遺伝子が同定されているが、未だ未知の摂食調節・肥満関連遺伝子の存在している可能性は大きい。II型糖尿病モデルであるOLETFラットの肥満の成因は未だ不明確である。そこで視床下部組織を用いたDifferential Display法により、肥満発症関連遺伝子の同定を試みた。【方法および結果】糖尿病は未発症ながら過体重を認める7週齢の雄性OLETFおよびLETOラット(N=各6)から視床下部組織を採取後、total RNAを抽出し、逆転写反応を行いcDNAを合成した。このcDNAを鋳型として[Y-^<32>P]dCTP標識3'アンカープライマー(GT12VG)と10merの任意5'プライマーを用いてPCRを行い、電気泳動後オートラジオグラフィーにて発現量を検討した。180種類のプライマーペアーを用いた結果、,OLETFラット視床下部で発現量が増加するmRNAバンドが4個、低下するものが14個再現性をもって認められた。これらのバンドを個々に切り出し、DNAを抽出後再増幅し、さらにサブクローニング後に塩基配列を決定した。結局、上記14個の候補cDNAのうちの1つ(任意5'プライマー:AGCGGCTAGG,mRNA fragment size:356bp)が、inner primer選択後に行った視床下部cDNAを鋳型としたRT-PCRにおいて、明らかにOLETFラットで発現量が低下していることが確認された。現在、5'RACE法等を用いて、この3'末端側cDNAフラグメントのクローニングとノザン法による視床下部組織でのmRNA発現量の差の確認ならびに各種組織での発現を調べる予定である。

In recent years, the possibility of the existence of "food regulation" and "fat-related" genes in the lower part of the visual bed has increased. Type II diabetes mellitus is a type of diabetes mellitus. The Differential Display method was used to determine the identity of the underlying tissues. [Methods and Results] Diabetes mellitus before the onset of excessive body weight, 7 weeks old male OLETF and LETO (N= 6 each), after the lower part of the optic bed tissue was taken, total RNA was extracted, reverse transcription and cDNA synthesis were carried out. This cDNA is typed into [Y-^<32>P]dCTP, which identifies 3'-mer (GT12VG) and 10-mer arbitrary 5'-mer. PCR is used to perform PCR, and electrophoresis is used to detect the expression of 3 '-mer. 180 kinds of mRNA expression increased by 4 and decreased by 14 in the lower part of OLETF. The DNA was extracted and then amplified, and the nucleotide sequence was determined. Results: 14 candidate cDNA sequences were identified by RT-PCR (arbitrary 5'primer: AGCGGCTATG,mRNA fragment size:356bp), and the lower part of the retina cDNA sequence was identified by RT-PCR after inner primer selection. Now, 5'RACE method and other methods are used to confirm the difference in mRNA expression in tissues under the optic bed and to adjust the expression in various tissues.