TPAによる巨核球系細胞への分化誘導における細胞周期制御機構の解析
TPA诱导巨核细胞分化的细胞周期调控机制分析
基本信息
- 批准号:08770845
- 负责人:
- 金额:$ 0.64万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
- 财政年份:1996
- 资助国家:日本
- 起止时间:1996 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
1.TPAによるサイクリンE-cdk2複合体キナーゼ活性制御の検討:MEG-01s細胞にTPA添加後、cdk inhibitor (CKI)のうちp21はmRNA、蛋白レベルとも上昇が見られ、これは細胞周期非依存性であった。一方、p27は蛋白質レベルは上昇し、細胞周期依存性にG1期に発現誘導されることが示唆されたが、mRNAレベルに変化はなかった。免疫沈降ウエスタン解析では、TPAで誘導されたこれらCKIはいずれもサイクリンEと共沈し、免疫沈降したサイクリンE複合体のヒストンH1、Rbキナーゼ活性は、ほぼ完全に抑制されていた。以上から、MEG-01sにおけるTPAによる分化誘導に伴う細胞周期停止は、TPAで誘導されたp21とp27がサイクリンE複合体に結合し、そのキナーゼ活性を抑制することによると想定された。その他の巨核球系細胞株の検討では、TPA添加後CMK,Meg-JではサイクリンE蛋白が増加したが、HELではほとんど変化が見られなかった。一方、いずれの細胞株もp21蛋白の発現が誘導され、p27蛋白は構成的な発現が見られ発現レベルに変化はなかった。以上のように、TPAによる細胞周期関連因子の発現は細胞株により異なっていた。2.正常巨核球のTPAによる分化誘導の解析:トロンボポチエン添加により臍帯血由来CD34陽性細胞から巨核球系コロニーを形成し、TPAを添加すると、CD41発現増強は見られるものの、サイクリンE、p21の発現増強は検出できなかった。p21のアンチセンスオリゴヌクレオチドを用いて分化誘導の阻害を試みることとし、MEG-01sを用いて至適条件の検討を行なっている。MEG-01sで見られる現象が、正常巨核球で見られるかどうかさらに検討する予定である。endomitosisにおける細胞周期制御は本年度は見るべき成果が得られなかった。
1. TPA inhibitor (CKI) and CDK2 inhibitor (CK21) increased in MEG-01s cells after addition of TPA. The expression of p27 protein was increased, and the expression of p27 mRNA was induced in G1 phase of cell cycle. Immuno-sedimentation analysis, TPA induction, CKI inhibition, immuno-sedimentation inhibition, Rb inhibition MEG-01s differentiation induced by TPA is accompanied by cell cycle arrest, TPA induction induced by p21 and p27, binding to MEG-01s and inhibition of MEG-01s activity. In addition, CMK,Meg-J and HEL were increased after addition of TPA. The expression of p21 protein was induced in some cell lines, and the expression of p27 protein was induced in some cell lines. The expression of cell cycle-related factors in the above mentioned cell lines is different from that in TPA cells. 2. Analysis of differentiation induction in normal megakaryocytes by TPA: CD34 positive cells derived from umbilical cord blood, megakaryocyte lineage formation, TPA addition, CD41 increased expression, p21 increased expression, p21 increased expression. p21's open source option is available for differentiation induced damage test, MEG-01s is available for selection under appropriate conditions. MEG-01s is a normal megakaryocyte. The endomitosis of cell cycle control is the result of this year's review.
项目成果
期刊论文数量(1)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Kaoru Uchimaru: "Detection of Cyatin D1 (bcl-1,PRAD1) overexpression by a Simple Competitive Reverse Tranacription-Polymeruse Chain Reaction Assay in t (11;14) (q13;732)-Bering B-cell Malignancies and/or Manrk Cell Lymphoma" Blood. 89 (in press). (1997)
Kaoru Uchimaru:“在 t (11;14) (q13;732)-Bering B 细胞恶性肿瘤和/或 Manrk 细胞中通过简单竞争性逆转录聚合酶链反应测定检测 Cyatin D1 (bcl-1,PRAD1) 过度表达
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