巨核球系細胞株の分化におけるG1サイクリンの役割

G1细胞周期蛋白在巨核细胞系分化中的作用

• 批准号: 06770835
• 负责人: 内丸 薫
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770835/
• 关键词: 巨核球; TPA; 分化誘導; G1サイクリン

1.対数増殖相における解析:巨核球系細胞株MEGO1Sに10nMのTPAを添加して24時間培養すると,増殖が停止し,フローサイトメトリーによる解析では81.1%の細胞がG0/G1期に存在した.ノーザン解析により細胞周期関連遺伝子の発現を検討すると,TPA刺激後24時間以内にサイクリンA,B,Cは順次発現が低下し,またS期を示すヒストンH4 mRNAも,サイクリンAと同様にTPA添加直後から急速に低下した.一方,D型サイクリン,サイクリンEは72時間まで変化せず,TPAによりMEGO1S細胞の多くは,D型サイクリン,サイクリンEを発現するG1/S移行期に細胞周期を停止することが示された.巨核球分化マーカーであるGpIIbは,24時間後にmRNAの上昇が始まり,48時間後にピークに達した.72時間以降immunocytochemistoryでもその蛋白は検出され,G1/S以降期に停止したのち分化誘導が生じていると考えられる.2.細胞周期同調による解析:Thymidine-Aphidicoline double blockによりG1/S移行期に細胞周期同調した細胞培養にTPAを添加すると,G1/S期から細胞周期を一周してG1期で停止する細胞に加えて,G2/M期にも約25%の細胞が停止していた.これは,TPAがS期でも作用しG2/M期での停止を誘導していることを示している.現在,他の巨核球系細胞株や,正常巨核球コロニーに対しても同様の作用を持っているかどうかを検討している.今後,TPAによる細胞周期停止の分子機構と分化誘導との関連を明らかにしたい.分化に伴う細胞周期制御の解析を優先したため,G1サイクリン過剰発現の影響の検討は進められなかった.

1. Analysis of the relative proliferation phase: When 10 nM TPA was added to the megakaryocyte cell line MEGO1S and cultured for 24 hours, proliferation stopped. Analysis showed that 81.1% of the cells were in the G0/G1 phase. The expression of cell cycle-related genes decreased in sequence within 24 hours after TPA stimulation, and decreased rapidly after TPA stimulation. One side, D type cell cycle, T type cell cycle. GpIIb mRNA increased 24 hours later and reached 48 hours later. 72 hours later, G1/S cells stopped at G1/S stage. 2. Analysis of cell cycle isoregulation: Thymidine-Ahidicoline double block increased G1/S cells stopped at G1/S stage, G2/M cells stopped at G2/M stage. TPA can be induced to stop in G2/M phase. Now, his megakaryocytic cell lines and normal megakaryocytic cells are working together to investigate the effects of these changes. In the future, the molecular mechanisms of cell cycle arrest and differentiation induced by TPA will be clarified. The analysis of cell cycle control in differentiation is a priority, and the influence of G1 differentiation on cell cycle development is discussed.

项目成果

Motokura.T.: "Clinical Significance of Serial Measurement of the Serum Levels of Soluble Interleukin-2 Receptor and Soluble CD8 in Malignant Lymphoma" Leukemia and Lymphoma. (in press).

Motokura.T.：“恶性淋巴瘤中可溶性白细胞介素 2 受体和可溶性 CD8 血清水平连续测量的临床意义”白血病和淋巴瘤。

Uchimaru.K.: "Bone Manow Stromal Cells Produce and Respond to Activin A:Interactions with Basic Fibroblast Growth Factor and Platelet Dereved Growth Factor" Experimental Haematology. (in press).

Uchimaru.K.：“骨髓基质细胞产生并响应激活素 A：与碱性成纤维细胞生长因子和血小板衍生生长因子的相互作用”实验血液学。