巨核球系細胞の分化成熟における細胞周期制御の解析

巨核细胞分化成熟过程中细胞周期调控分析

• 批准号: 07770856
• 负责人: 内丸 薫
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07770856/
• 关键词: 巨核球; 分化; TPA; サイクリンE; p21

巨核球系細胞株MEG01sでTPAによる分化誘導時の各種サイクリン蛋白の発現をウエスタン解析により検討した。昨年度のノザン解析での結果と同様、サイクリンE蛋白を発現して細胞周期を停止し、これはimmunocytochemistryでも確認された。thymidne-aphidicokinによる細胞周期同調系においては、G1-S移行期から細胞周期進行に伴いサイクリンE蛋白は発現レベルが減少した後、G1期に再上昇し、再周期進行は停止した。これは、TPAがS期からG1期への再周期進行を阻害せず、サイクリンE蛋白発現以降の機構に作用していることを示唆している。cdkについては、cdk1,cdk2, cdk4のmRNAレベルには変化は認められず、蛋白量は、cdk2はごく軽度増加したが、cdk4には変化が見られなかった。従って、この細胞周期停止は、サイクリンもしくはcdkの発現の低下ではなく、その活性の抑制によることが想定され、cdk抑制因子p21/cip1の発現を解析した。p21ははTPA添加1時間後からmRNAレベルの、4時間後には蛋白量の上昇が見られた。その発現レベルはTPA用量依存性で、増殖抑制と平行していた。以上から、TPAによる増殖抑制にp21によるcdkの活性抑制が関与していると考えられた。他の巨核球系細胞株(CMK, HEL, Meg-J, MOLM-1)の解析では、MOLM-1を除き、TPAによる増殖抑制にサイクリンEの発現を伴い、同時にp21蛋白が誘導された。以上から、巨核球の分化へのp21の関与が示唆された。現在TPA添加時のサイクリンE複合体の活性を検討中である。また、骨髄穿刺液から得られる正常巨核球、さらに巨核球コロニーを用いてimmunocytochemistryによりサイクリンE、p21の発現を検討し、正常巨核球分化過程における細胞周期関連因子の制御について検討を進める予定である。endomitosisの分子機構については、有意な結果を得ることができなかった。

Giant nuclear ball is cell lines MEG01s で TPA に よ る の induction with various サ イ ク リ ン protein の 発 now を ウ エ ス タ ン parsing に よ り beg し 検 た. Yesterday's annual の ノ ザ ン parsing で と の results with others, サ イ ク リ ン E protein を 発 now し て cell cycle を stop し, こ れ は immunocytochemistry で も confirm さ れ た. Thymidne - aphidicokin に よ る cell cycle homology is に お い て は transitional period, the G1 - S か ら cell cycle に with い サ イ ク リ ン E protein は 発 now レ ベ ル が reduce し た, G1 phase after に rise し and cycle は stop し た. こ れ は, TPA が S period か ら G1 phase へ の cycle again を resistance against せ ず, サ イ ク リ ン E protein 発 now onwards の institutions に role し て い る こ と を in stopping し て い る. CDK に つ い て は, cdk1, cdk2, cdk4 の mRNA レ ベ ル に は variations change は recognize め ら れ ず, protein amount は, cdk2 は ご く degree of 軽 rights し た が, cdk4 に は variations change が see ら れ な か っ た. 従 っ て, こ の cell cycle stop は, サ イ ク リ ン も し く は CDK の 発 now low の で は な く, そ の inhibition に の よ る こ と が scenarios さ れ, CDK inhibition factor p21 / cip1 の 発 now を parsing し た. After 1 time of addition of p21 <s:1> <s:1> TPA, the が らmRNAレベ レベ レベ <e:1> <s:1> increased, and after 4 time, the に <s:1> protein quantity <e:1> increased が see られた. Youdaoplaceholder0 そ そ shows レベ レベ TPA dosage dependence で and growth inhibition と parallel て て た た. The above ら ら, TPAによる proliferation inhibition にp21によるcdk <s:1> activity inhibition が is related to the て て ると ると ると ると えられた examination えられた. He の megakaryocytes, ball is a cell line (CMK, HEL, Meg - J, MOLM - 1) の parsing で は, を except き MOLM - 1, TPA に よ る raised colonization inhibit に サ イ ク リ ン E の 発 now い を companion, as well as に p21 protein induced さ が れ た. The above された ら, giant nuclear sphere <s:1> differentiation へ <s:1> p21 <e:1> is related to が and が indicates された. Now when TPA is added, the <s:1> サ, リ, リ, リ E complex <s:1> is active を検 in である. ま た, bone marrow puncture fluid か ら have ら れ る megakaryocytes, ball, normal さ ら に giant nuclear ball コ ロ ニ ー を with い て immunocytochemistry に よ り サ イ ク リ ン E, p21 の 発 を now beg し 検, normal megakaryocytes differentiation に お け る cell cycle masato even factor の suppression に つ い て beg を 検 into め る designated で あ る. endomitosis <s:1> molecular mechanism に に に て て った intentional results を る とがで とがで な な な な った った った った った な な な った った った.