プロテアソームへのユビキチン化基質のターゲッテング機構の解析

泛素化底物对蛋白酶体的靶向机制分析

• 批准号: 14037254
• 负责人: 嘉村 巧
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14037254/
• 关键词: プロテアソーム; ユビキチン; タンパク質分解

ユビキチン・プロテアソーム系を介したタンパク質分解は細胞周期・シグナル伝達・脳変性疾患等に中心的な役割を果たしている。タンパク質へのユビキチン化反応には、E1,E2,E3の酵素群が関与し、この分野に関する研究は急速に進んでいるが、その後のステップであるポリユビキチン化タンパク質のプロテアソームへのターゲッテング機構に関してはほとんど明らかになっていない。最近、我々は生化学的手法を用いて、p140 (C末側にRINGフィンガー配列を持つ)とp50 (N末側にUBL配列、C末側に2つのUBA配列を持つ)の2量体からなる複合体を、CDKインヒビターp27Kip1に対する新たなE3として細胞抽出液より分離・精製した。近年UBLおよびUBA配列をもつタンパク質の機能解析が盛んに行われているが、我々が同定したp50に関する報告はいまだなされていない。そこで本研究ではp50のユビキチン・プロテアソーム系に対する影響を生化学的、細胞生物学的方法を用いて解析することを目的とする。現在までに、試験管内および細胞内でp50がプロテアソームおよびユビキチンと結合することを確認している。また試験管内でのp27のユビキチン化反応に対してp50が抑制的に作用することも確認している。そしてp27の分解に対する影響をp50の過剰発現あるいはp50に対するRNA干渉法をもちいて検討中である。さらにはp50のノックアウトマウスの作製中であり、個体レベルでのp50の影響を検討する予定である。p50/p140複合体とプロテアソームとの関係が明らかになれば、ポリユビキチン化タンパク質のプロテアソームへのターゲッテング機構解明の手がかりとなると考えられる。

The cell cycle is the center of the cell cycle, and so on. The enzyme groups of E1,E2 and E3 are related to the rapid progress of the research on the separation of the enzyme groups. Recently, we have used biochemical methods such as p140 (RING alignment at the end of C) and p50 (UBL alignment at the end of N, UBA alignment at the end of C) to separate and refine cell extracts from 2-volume complexes, CDK and p27 Kip1. In recent years, UBL and UBA have been arranged in different ways, and the functional analysis of the quality of the products has been carried out in different ways. This study aims to analyze the effects of p50 on biological and cytobiological methods. Now, try to confirm the p50 in the tube and in the cell. The p27 in the test tube was found to have a negative effect on the p50 inhibition. p50 RNA RNA RNA In this paper, we discuss the effect of p50 in the process of operation and individual evaluation. The p50/p140 complex is a complex of complex molecules. The structure of p50/p140 complex molecules is very complex.

项目成果

Miyamoto, A et al.: "Increased proliferation of B cells and auto-immunity in mice lacking protein kinase Cdelta"Nature. 416. 865-869 (2002)

Miyamoto, A 等人：“缺乏蛋白激酶 Cdelta 的小鼠 B 细胞增殖和自身免疫增强”Nature。

Brower, CS et al.: "Mammalian mediator subunit mMED8 is an Elongin BC-interacting protein that can assemble with Cul2 and Rbx1 to reconstitute a ubiquitin ligase"Proc.Natl.Acad.Sci. USA. 99. 10353-10358 (2002)

Brower, CS 等人：“哺乳动物介导亚基 mMED8 是一种 Elongin BC 相互作用蛋白，可以与 Cul2 和 Rbx1 组装以重建泛素连接酶”Proc.Natl.Acad.Sci。

Kamura, T et al.: "A molecular basis for stabilization of the Von Hippel-Lindau (VHL) tumor suppressor protein by components of the VHL ubiquitin ligase"J.Biol.Chem.. 277. 30388-30393 (2002)

Kamura, T 等人：“VHL 泛素连接酶成分稳定 Von Hippel-Lindau (VHL) 肿瘤抑制蛋白的分子基础”J.Biol.Chem.. 277. 30388-30393 (2002)

Imai Y.et al.: "CHIP is associated with Parkin, a gene responsible for familial Parkinson's disease, and enhances its ubiquitin ligase activity"Mol. Cell. 10. 55-67 (2002)

Imai Y. 等人：“CHIP 与 Parkin（一种导致家族性帕金森病的基因）相关，并增强其泛素连接酶活性”Mol.

Ishida N. et al.: "Phosphorylation of p27^<Kip1> on serine 10 is required for its binding to CRM1 and nuclear export"J. Biol. Chem.. 277. 14355-14358 (2002)

Ishida N. 等人：“p27^<Kip1> 在丝氨酸 10 上的磷酸化是其与 CRM1 结合和核输出所必需的”J.