口腔前癌病変における各種癌抑制遺伝子の検索

寻找口腔癌前病变中的多种抑癌基因

• 批准号: 08771565
• 负责人: 寺島 龍一
• 金额: $ 0.32万
• 依托单位: Toyama Medical and Pharmaceutical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08771565/
• 关键词: p53; PCR; SSCP; PCR-SSCP

口腔前癌病変28例(severe dysplasia9例、moderate dysplasia5例、milddysplasial4例)からDNAを抽出し癌抑制遺伝子P53をPCR-SSCP法にて解析した。1.DNAの抽出ホルマリン固定後にパラフィン包埋された標本を薄切(4-5μm)、yleneにて脱パラ後粉砕し、proteinaseKに溶解してDNAを抽出した。2.P53遺伝子のPCR-SSCP抽出したDNA(0.1-1μg)、50mM KCl、10mM TrisHCl、1.5mM MgCl_2、dNTP(dATP,dCTP,dGTP,dTTP)各0.2mM、0.01%gelatin、primer各25-100pmole、TaqDNApolymerase2.5-5単位を100μlの反応液とし、これに〔α-32P〕dCTP(10mCi/μl)0.1μlを添加してThermal Cyclerを使用して反応を行った。PCR産物はformamide-色素溶液で100倍に希釈し100℃10分加熱変性後、6%polyacrlyamideゲル中にて電気泳動した。電気泳動後、ゲルを乾燥しオートラジオグラフィーを行いバンドを検出した。3.結果口腔前癌病変28例中5例(17.9%)にp53遺伝子の変異を認め、これらはすべて第5エクソンに認められた。dysplasiaの程度別ではsevere dysplasiaに3例認め、moder ate dysplasia、mild dysplasiaに各1例認めた。

28 cases of oral precancerous diseases (severe dysplasia9 cases, moderate dysplasia5 cases, milddysplasia 4 cases) were analyzed by PCR-SSCP. 1. DNA extraction: After fixation, DNA was extracted by thin-cut (4-5μm), ethylene was removed from DNA, and protein K was dissolved. 2. PCR SSCP of P53 gene was extracted from DNA(0.1-1μg), 50mM KCl, 10mM TrisHCl, 1.5 mM MgCl2, dNTP(dATP,dCTP,dGTP,dTTP) 0.2 mM, 0.01% gelatin, primer 25-100pmole, TaqDN polymerase 2.5 -5 positions, and 0.1μl of α-32 P dCTP (10mCi/μl). PCR products were converted to formamide-dye solution at 100 fold and then heated at 100℃ for 10 min. After the electric shock, the water was removed from the tank. 3. Results 5 cases (17.9%) of 28 cases of oral precancerous diseases had different p53 gene expression. The degree of dysplasia is not severe. 3 cases of dysplasia, 1 case of moderate dysplasia, 1 case of mild dysplasia.