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アフィニティープローブを用いたアシルCoAの新規標的蛋白質の検索と生理作用の解明

使用亲和探针寻找酰基辅酶A的新靶蛋白并阐明其生理效应

基本信息

批准号：
08772110
负责人：
山下純
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Teikyo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1、アシルCoAの標的(結合)蛋白質の検出、精製アシルCoAと結合する蛋白質を検索するために、アシルCoAの脂肪酸部分に光感受性基を導入したフォントアフィニティープローブを合成した。検出を容易にするため、125Iで標識した。蛋白質とフォトアフィニティプローブをインキュベートした後、UVを照射し、SDS電気泳動後にオートラジオグラフィーで検出すると、ラット肝臓ミクロソームに数種類のアシルCoA結合性蛋白質を検出できた。これらのなかでひとつを精製した。精製蛋白質のアミノ酸配列を検討すると、薬物や脂溶性内因性物質をグルクロン酸抱合するUDPグルクロン酸転移酵素であることが明らかとなった。本研究により、UDPグルクロン酸転移酵素がアシルCoA結合性蛋白質であること示された。2、UDPグルクロン酸転移酵素のアシルCoA結合活性の解析UDPグルクロン酸転移酵素のアシルCoA結合活性のKinetics、アシルCoAの構造活性相関などを詳細に実験した。アシルCoA結合のKd値はおよそ10μMであり、Bmax価はおよそ1mol/mol proteinであった。アシルCoA結合は、アシルCoAに特異的で、CoA部分の3'ーリン酸を除いたアシルデホスホCoAには結合活性は無かった。この蛋白質がCoA部分を厳密に認識していることが考えられた。しかし、脂肪酸部分の特異性は比較的ゆるく、脂肪酸アナログであるアジドサリチルアミドドデカン酸をもつアシルCoAにも結合活性があった。3、UDPグルクロン酸転移酵素のアシルCoA結合の生理的な意義UDPグルクロン酸転移酵素活性がアシルCoA結合により阻害されることをみいだした。今までにUDPグルクロン酸転移酵素活性を活性化あるいは阻害する化合物などは知られていなかったが、アシルCoAは初めて見いだされた阻害物質である。細胞内のアシルCoAの変動により、UDPグルクロン酸転移酵素活性が調節される可能性が考えられた。

1. The protein of CoA was extracted, the protein of CoA was combined with the protein of CoA, and some of the photosensitive bases of the fatty acids were introduced into the synthesis of the protein. It is easy to find out that it is easy to read 125i. The protein concentration was measured. After the exposure to UV, the CoA was irradiated, and the SDS was tested after swimming. The results showed that the combined protein of CoA was detected after the swimming exercise. I don't know. I don't know what to do. Protamine, UDP, lactic acid, lactic acid, liposoluble, acid-soluble, acid-soluble, acid-soluble In this study, UDP, acid transferase, CoA binding protein, acid transfer enzyme, CoA binding protein, acid transferase, protein binding protein, acid transferase, acid transfer 2. UDP enzyme transfer enzyme assay CoA binding activity analysis UDP enzyme transfer enzyme CoA binding activity Kinetics, CoA binding activity assay. The combination of the Kd CoA and the Bmax filter shows that the 10 μ M temperature is low, and the 1mol/mol protein temperature is low. The combination of CoA, CoA, and CoA in part 3', respectively, is not sensitive to the activity of CoA. In the CoA section, you need to know the details of the test. Fatty acids, fatty acids 3. UDP, acid transfer enzyme, acid transfer enzyme, CoA, physiological meaning, acid transfer enzyme activity, acid transfer enzyme activity, acid transfer CoA, block injury, acid transfer enzyme, acid transfer enzyme activity, acid transfer enzyme activity, acid transfer Now, the UDP enzyme activity is activated, the compounds are blocked, the compounds are known, and the CoA compounds are known to be sensitive. Intracellular CoA enzyme activity, UDP enzyme activity, enzyme transfer activity, and the possibility of enzyme transfer were studied.