リゾホスファチジルイノシトールアシルトランスフェラーゼの性状と新しい機能の検索

寻找溶血磷脂酰肌醇酰基转移酶的性质和新功能

基本信息

批准号：
05771988
负责人：
山下純
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Teikyo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

リン脂質の脂肪酸リモデリング系に関与する酵素を分子レベルで理解することを目的として、アシルCoA:リゾリン脂質アシルトランスフェラーゼ系を膜から可溶化し分離精製をおこなった。これまでリゾリン脂質アシルトランスフェラーゼ系酵素は界面活性剤により強く阻害されるため可溶化や精製は困難であったが、両イオン性界面活性剤のCHAPSを用いラット肝臓ミクロソームから酵素の失活なく可溶化することに成功した。さらに可溶化した酵素活性をカラムクロマトグラフィーを用いて分離精製を行い、リゾホスファチジルコリンアシルトランスフェラーゼとリゾホスファチジルイノシトール(リゾPI)アシルトランスフェラーゼ活性を分離することができた。また、リゾPIのsn-1位に脂肪酸を導入する酵素とsn-2位に導入する酵素も分離することができ、リゾリン脂質アシルトランスフェラーゼに、リゾリ脂質の種類や脂肪酸の導入位置を異にする数種類の酵素が存在することが示された。1-アシルリゾPIを基質とするアシルトランスフェラーゼの部分精製を行い性質を検討した。アシルCoAに対する特異性は酵素が存在する状態により変化し、リン脂質の存在時には(ミクロソームでの状態に比較的近い)、アラキドニルCoAに対し最も高いことが明かになった。このことは肝臓に、2-アラキドニルPIが多量に存在するという事実を説明でき、リゾPIアシルトランスフェラーゼがPIのリモデリング系に関与することが強く示唆された。また、部分精製標品はアシルトランスフェラーゼの逆反応の活性も存在し、CoA依存的にPIを分解しうることが示された。

为了了解分子水平磷脂脂肪酸重塑系统中涉及的酶，从膜上溶解并分离和纯化酰基-COA：溶液磷脂酰基转移酶系统。到目前为止，表面活性剂强烈抑制溶物磷脂酰基转移酶，溶解化和纯化一直很困难，但是使用ZWITTRICENICINIC表面活性剂CHAP，我们成功地将它们从没有失活的大鼠肝微粒体中溶解。此外，将溶解的酶活性分离并使用柱色谱法分离并纯化，从而可以分离溶血磷脂酰胆碱酰基转移酶和溶血磷脂酰肌醇（Lysopi）酰基转移酶的活性。此外，可以分离在SN-2位置引入的lysopi和酶的SN-1位置引入脂肪酸的酶可以分离，这表明溶物磷脂酰基转移酶中有几种类型的酶在脂蛋白脂质的类型和脂肪酸引入的位置上有所不同。使用1-酰基透析酶作为底物进行酰基转移酶的部分纯化以研究其特性。酰基辅酶A的特异性根据存在酶的状态而变化，并且发现在存在磷脂（相对接近微粒体的磷脂）的情况下，它是Arachidonyl-COA的最高水平。这可以解释以下事实：肝脏中存在2-芳基二酮Pi，强烈表明lysopi酰基转移酶参与PI的重塑系统。还表明，部分纯化的制剂具有酰基转移酶反向反应的活性，并且可以以COA依赖性方式降解PI。