イノシトールリン脂質の分子種特異的生合成機構と情報伝達系への関与

肌醇磷脂分子物种特异性生物合成机制及其参与信号转导系统

• 批准号: 06780513
• 负责人: 山下 純
• 金额: $ 0.51万
• 依托单位: Teikyo University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06780513/
• 关键词: イノシトールリン脂質; リゾリン脂質; アシルCoA; CoA; アシルトランスフェラーゼ; アラキドン酸

イノシトールリン脂質の脂肪酸リモデリング系に関与する酵素を分子レベルで理解することを目的として、アシルCoA:リゾホスファチジルイノシトール(リゾPI)アシルトランスフェラーゼを膜から可溶化し、分離精製をおこなった。本酵素を含めリゾリン脂質アシルトランスフェラーゼ系酵素は界面活性剤により強く阻害されるため、これまで可溶化や精製は困難であったが、両イオン性界面活性剤のCHAPSを用いラット肝臓ミクロソームから酵素の失活なく可溶化することに成功した。さらに可溶化画分をカラムクロマトグラフィーを用いて分離精製を行い、リゾホスフアチジルコリンアシルトランスフェラーゼ活性とリゾPIアシルトランスフェラーゼ活性を分離することができた。また、リゾPIのsn-1位に脂肪酸を導入する酵素とsn-2位に導入する酵素も分離することができ、リゾリン脂質アシルトランスフェラーゼに、リゾリ脂質の種類や脂肪酸の導入位置を異にする数種類の酵素が存在することが示された。1-アシルリゾPIを基質とするアシルトランスフェラーゼの部分精製標品を用い性質を検討した。アシルCoAに対する特異性は酵素が存在する状態により変化し、リン脂質の存在時には(ミクロソームでの状態に比較的近い)、アラキドニルCoAに対する活性が最も高いことが明かになった。このことは肝臓に、2-アラキドニルPIが多量に存在するという事実を説明でき、リゾPIアシルトランスフェラーゼがPIのリモデリング系、分子種特異的生合成に関与することが強く示唆された。また、部分精製標品はアシルトランスフェラーゼの逆反応の活性も存在し、CoA依存的にPIを分解しうることが示された。PIは種々の情報伝達系に関与することより、本酵素によるCoA依存的なPIの分解が、多くの細胞機能を変化させることが考えられた。本酵素によりアシルCoAが同時に産生することより、アシルCoA依存性酵素の活性調節にも関与することが考えられた。

イ ノ シ ト ー ル リ ン lipid の fatty acids リ モ デ リ ン グ department に masato and す を る enzyme molecule レ ベ ル understand で す る こ と を purpose と し て, ア シ ル CoA: リ ゾ ホ ス フ ァ チ ジ ル イ ノ シ ト ー ル (リ ゾ PI) ア シ ル ト ラ ン ス フ ェ ラ ー ゼ を membrane か ら solubilization し, separation of refined を お こ な っ た. This enzyme を め リ ゾ リ ン lipid ア シ ル ト ラ ン ス フ ェ ラ ー ゼ は interface system enzyme activity of tonic に よ り く strong resistance against さ れ る た め, こ れ ま で solubilization や refined は difficult で あ っ た が, struck イ オ ン interface of sexual activity tonic の CHAPS を with い ラ ッ ト routine liver ミ ク ロ ソ ー ム か ら enzyme inactivation の な く solubilization す る こ と に successful し た. さ ら に solubilization draw points を カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー を with い て separation line of refined を い, リ ゾ ホ ス フ ア チ ジ ル コ リ ン ア シ ル ト ラ ン ス フ ェ ラ ー ゼ active と リ ゾ PI ア シ ル ト ラ ン ス フ ェ ラ ー ゼ active を separation す る こ と が で き た. ま た, リ ゾ PI の sn - 1 に fatty acids を import す る enzyme と sn - two に import す も る enzyme separation す る こ と が で き, リ ゾ リ ン lipid ア シ ル ト ラ ン ス フ ェ ラ ー ゼ に, リ ゾ リ lipid の の import position を different kinds や fatty acids に す る が exist several kinds の enzyme す る こ と が shown さ れ た. 1 - ア シ ル リ ゾ PI を matrix と す る ア シ ル ト ラ ン ス フ ェ ラ ー ゼ の part refined property using standard product を い を beg し 検 た. ア シ ル CoA に す seaborne る specificity は enzyme が exist す る state に よ り - し, リ ン lipid の exists に は (ミ ク ロ ソ ー ム で の state に comparison nearly い), ア ラ キ ド ニ ル CoA に す seaborne る high active が most も い こ と が Ming か に な っ た. こ の こ と は liver perforatien に, 2 - ア ラ キ ド ニ ル PI が に exist abundant す る と い う things be を illustrate で き, リ ゾ PI ア シ ル ト ラ ン ス フ ェ ラ ー ゼ が PI の リ モ デ リ ン グ, molecular species specific biosynthesis に masato and す る こ と が く and shown strong sucking さ れ た. ま た, part of the refined standard product は ア シ ル ト ラ ン ス フ ェ ラ ー ゼ の negative 応 の active も し, CoA dependent に PI を decomposition し う る こ と が shown さ れ た. PI は kind 々 の intelligence 伝 da system に masato and す る こ と よ り, this enzyme に よ る CoA dependent な PI が の decomposition, multiple く の を cell function - the さ せ る こ と が exam え ら れ た. This enzyme に よ り ア シ ル CoA が に at the same time produce す る こ と よ り, ア シ ル CoA の dependency enzyme activity regulating に も masato and す る こ と が exam え ら れ た.

项目成果

Takayuki Sugiura: "Platelet-activating factor and related lipid molecules in invertebrates" J.Lipid Mediators Cell Signaling. 10. 185-186 (1994)

Takayuki Sugiura：“无脊椎动物中的血小板激活因子和相关脂质分子”J.Lipid Mediators Cell Signaling。

Takayuki Sugiura: "Coenzyme A-dependent modification of fatty acyl chains of rat liver membrane phospholipids:possible involvement of ATP-independent acyl-CoA synthesis" J.Lipid Res.(in press). (1995)

Takayuki Sugiura：“大鼠肝膜磷脂脂肪酰基链的辅酶 A 依赖性修饰：可能参与不依赖 ATP 的酰基辅酶 A 合成”J.Lipid Res.（出版中）。

Atsushi Yamashita: "Induction of coenzyme A-dependent transacylation activity in rat liver microsomes by administration of clofibrate" Biochim.Biophys.Acta. 1211. 263-269 (1994)

Atsushi Yamashita：“通过给予安妥明在大鼠肝微粒体中诱导辅酶 A 依赖性转酰基活性”Biochim.Biophys.Acta。

Takayuki Sugiura: "Coenzyme A-dependent cleavage of membrane phospholipids in several rat tissues:ATP-independent acyl-CoA synthesis and the generation of lysophospholipids" Biochim.Biophys.Acta. (in press). (1995)

Takayuki Sugiura：“几种大鼠组织中膜磷脂的辅酶 A 依赖性裂解：ATP 独立的酰基辅酶 A 合成和溶血磷脂的生成”Biochim.Biophys.Acta。