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大腸菌supF遺伝子を標的遺伝子としたトナンスジェニックマウス系の樹立

大肠杆菌supF基因转基因小鼠系的建立

基本信息

批准号：
08780505
负责人：
布柴達男
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

近年の人発がん原因としての変異原性評価に、変異のタイプと場所といういわゆる変異スペクトル面からの評価が重要視されていることから、本研究では大腸菌のsupF遺伝子を標的とした新しい変異スペクトル解析用トランスジェニックマウス系の樹立を目的とした。今年度の研究成果は、二点に大別できる。1)これまでに樹立されている数種のトランスジェニックマウス系には変異標的遺伝子の選択法に偽陽性を誤選択するという問題がある。これらを解決するべく、本系では変異体の選択法に独自の工夫を凝らし、高感度で確実な変異標的遺伝子選択法を確立した。2)supF遺伝子を、市販のラムダファージベクターZAPIIに挿入し、哺乳類細胞に導入するためのコンストラクトを作成した。1)では、染色体DNAにNal抵抗性を示す変異gyrAを、さらにSm抵抗性を示す変異strAを導入した大腸菌TN41と、site-directed mutagenesisによりgyrAとstrAにアンバー変異を導入した、gyrAamとstrAamをもつプラスミドpOF105を作成した。TN41/pOF105はsupFを導入すると、プラスミド上のgyrAamとstrAamが共にサプレスされ、NalとSmに感受性を示したが、約3-5x10^<-7>の頻度で生じたNalとSm抵抗性コロニーの標的遺伝子supFをシーケンスした結果、すべてのNalとSm抵抗性細胞のsupF遺伝子に変異が確認できた。以上のことはこの選択法が効率よく確実に変異体のみを分離できる有効な方法であることを示している。2)ではsupF遺伝子を組み込んだラムダファージZAPIIsupFを作成した。この際、哺乳細胞内での転写鎖/非転写鎖での生じる変異の相違を検討するため、SV40のプロモーターに調節されるsupF遺伝子をsense/antisenseに、さらにマーカーとしてSV40のプロモーターをもつneo遺伝子を繋いだ。現在、マウスの受精卵にマイクロインジェクションし、従来の方法でトランスジェニックマウス系を作成すると同時に、ヒトのリンパ球細胞にもマイクロインジェクションし、トランスジェニックマウス系と併せて、哺乳類細胞系の樹立も試みている。樹立したトランスジェニックマウスの臓器や哺乳類細胞からDNAを回収し、パッケージングした場合を想定し、ZAPIIsupFをTN41/pOF105に溶原化した場合でも上述の選択法が有効であることはすでに確認できた。

In recent years, the reasons for the development of Escherichia coli are different from those of other bacteria in different places. In this study, the purpose of establishing a new system of Escherichia coli supF gene is to establish a system of Escherichia coli supF gene analysis. This year's research results are two points. 1) This problem is caused by the establishment of several types of false positives in the selection method of false positives in the selection system of different target genes. This system has established a unique and highly sensitive selection method for the selection of different candidates. 2) Suppress gene expression, market research and development, introduction of mammalian cells, and production of gene expression. 1) Chromosome DNA Nal resistance is shown in different gyrA, Sm resistance is shown in different strA introduced into E. coli TN41, site-directed mutagenesis is shown in different gyrA and strA introduced into different gyrAam and strAam introduced into E. coli TN41, site-directed mutagenesis is shown in different gyrAam and strAam introduced into E. coli TN41 and site-directed mutagenesis is shown in different gyrAam and strAam introduced into E. coli TN 41. TN41/pOF105 supF is introduced at a frequency of approximately 3-5x10^, and the Nal Sm resistant cell supF is introduced at a frequency of approximately 3-5x10^<-7>. The Nal Sm resistant cell supF is introduced at a frequency of approximately 3-5x10^. The above method of selection is effective and accurate. The method of separation is effective. 2) ZAPIIsupF is made up of two parts. At this time, the difference between write lock and non-write lock in mammalian cells is discussed. SV40 is regulated by sense/antisense. SV40 is regulated by sense/antisense. The present invention relates to a method for preparing a sperm cell line, a method for preparing a sperm cell line, and a method for establishing a mammalian cell line. In the case where the mammalian cells are isolated from DNA, the ZAPIIsupF TN41/pOF105 lysis is determined, and the above selection method is confirmed.