プロテインキナーゼCファミリーの細胞内局在化及び活性化を行う蛋白質の検索と解析

搜索和分析细胞内定位和激活蛋白激酶 C 家族的蛋白质

• 批准号: 08780589
• 负责人: 黒田 俊一
• 金额: $ 0.7万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08780589/
• 关键词: シグナル伝達; 蛋白質リン酸酵素; 機能ドメイン; LIMドメイン; PKC

ラット脳由来cDNAから酵母Two-Hybrid法により、プロテインキナーゼC(PKC)の制御領域に結合する蛋白質として5種類の蛋白質を得たが、その中にZnフィンガーの一種であるLIMドメインを含む蛋白質(ENH)が含まれていた。ENHのN末端側には、細胞膜局在化を行うPDZドメインを有し、C末端側には3コピーのLIMドメインを有していた。PKCと結合する部位は、欠失変異体を用いる解析から、LIMドメインの少なくとも一つが必要であることが判明した。また、他のLIMドメインを含む蛋白質も同様に、それらのLIMドメインを介してPKCのサブタイプ特異的に結合できることが判明した。LIMドメインを含む蛋白質群は動物の胚発生の直後に一過性に発現し、四肢発生の過程で重要な役割を演じている蛋白質であることが判明している。しかしながら、その過程におけるLIMドメインの役割は、蛋白質間相互作用に関与していると推察されていただけで、実際にどの様な役割を演じているのかは分かっていなかった。今回、LIMドメインがPKCと一般的に結合できることを明らかにしたことで、今後LIM蛋白質の機能の解明に新たな展開が期待できるようになった。

ラ ッ ト 脳 origin cDNA か ら yeast Two Hybrid method に よ り, プ ロ テ イ ン キ ナ ー ゼ C (PKC) の に suppression field combining す る protein と し て five kinds の protein を た が, そ の に in zinc フ ィ ン ガ ー の a で あ る LIM ド メ イ ン を including む protein (ENH) が ま れ て い た. ENH の N terminal side に は line, cell membrane in turn を う PDZ ド メ イ ン を し, C terminal side に は 3 コ ピ ー の LIM ド メ イ ン を have し て い た. PKC と combining す る parts は, owe lost - variant を with い る parsing か ら, LIM ド メ イ ン の less な く と も a つ が necessary で あ る こ と が.at し た. ま た, he の LIM ド メ イ ン を む protein content も with others に, そ れ ら の LIM ド メ イ ン を interface し て PKC の サ ブ タ イ プ specific に combining で き る こ と が.at し た. LIM ド メ イ ン を む protein content group は animals born の embryo 発 の straight after に transient に 発 し now, limb 発 raw の cut を play important な で service じ て い る protein で あ る こ と が.at し て い る. し か し な が ら, そ の process に お け る LIM ド メ イ ン cut は の service, protein interaction between に masato and し て い る と push examine さ れ て い た だ け で, be interstate に ど の others cut を な service play じ て い る の か は points か っ て い な か っ た. Today back, LIM ド メ イ ン が PKC と general に combined で き る こ と を Ming ら か に し た こ と で, future LIM protein の functional の interpret に new た な expand が expect で き る よ う に な っ た.

项目成果

藤沢幸夫: "遺伝子組換え法によるpre-S2含有B型肝炎ワクチン製造法の開発" 日本農芸化学会誌. 70. 993-999 (1996)

Yukio Fujisawa：“利用基因重组开发含前S2的乙型肝炎疫苗的生产方法”日本农业化学学会杂志70. 993-999（1996）。

Kuroda,S.: "Protein-Protein Interaction of Zinc Finger LIM Domains with Protein Kinase C" J.Biol.Chem.271. 31029-31032 (1996)

Kuroda,S.：“锌指 LIM 结构域与蛋白激酶 C 的蛋白质-蛋白质相互作用”J.Biol.Chem.271。

Matsuzaki,H.: "Isolation of the active form of RAC-protein kinase(PKB/Akt)from transfected COS7 cells treated with heat shock." FEBS Letters. 396. 305-308 (1996)

Matsuzaki,H.：“从热休克处理的转染 COS7 细胞中分离活性形式的 RAC 蛋白激酶 (PKB/Akt)。”

Konishi,H.: "Activation of RAC-protein kinase by heat shock and hyperosmolarity stress through a pathway independent of phosphatidylinositol 3-kinase." Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 93. 7639-7643 (1996)

Konishi,H.：“热休克和高渗透压应激通过独立于磷脂酰肌醇 3 激酶的途径激活 RAC 蛋白激酶。”