ナフチルアミン分解菌の分子育種に関する研究

萘胺降解菌分子育种研究

• 批准号: 09750881
• 负责人: 武尾 正弘
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Himeji Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09750881/
• 关键词: ナフチルアミン; アニリン; PCR; 酵素機能改変; Acinetobacter

本研究では、既知のPseudomnas putida由来のナフタレンジオキシゲナーゼ遺伝子に、我々が先にクローニングしたAcinetobacter sp.YAA株由来のアニリンジオキシゲナーゼ遺伝子の一部を組み込み、この組換えDNA分子を各種細菌に導入し、発癌性を有するナフチルアミンの分解菌を新規に育種することを目的としている。平成9年度は、組換えDNA分子の構築と大腸菌での遺伝子の発現を目的に、まず、ナフタレン分解菌P.putida PpG1064(NAH)から抽出したナフタレン分解ブラスミドNAHを鋳型として、ナフタレンジオキシゲナーゼ遺伝子nahAaAbAcAdをPCR法により増幅し、これを大腸菌にクローニングした。次いで、アニリンジオキシゲナーゼ遺伝子atdA1A2A3A4A5のうち、アミノ基の認識と脱離に関与すると推定されるA1及びA2蛋白をコードしたatdA1A2遺伝子部分を同様に増幅し、ナフタレンジオキシゲナーゼ遺伝子のnahAcとnahAd間にある制限酵素Sal/I部位に挿入し、大腸菌ヘクローニングした(実験の都合上、挿入位置を変更した)。得られたクローンから組換えブラスミドを抽出し、制限酵素分析を行ったところ、設計した組換えDNA分子が得られたことがわかった。平成10年度は、まず、この大腸菌クローンを用いてナフチルアミン分解試験を行ったところ、残念ながらナフチルアミンの分解能を持たないことがわかった。発現の問題を考慮して、この組換えDNA分子を遺伝子供与株の属するPseudomonas属細菌及びAcinetobacter属細菌へ導入するために、グラム陰性菌用ベクターpKT230へつなぎ換え、Pseudomonas putida KT2440株及びAcinetobacter sp.BD413株に導入を試みたところ、KT2440株の組換え体は得られたが、BD413株への導入には成功しなかった。そこで、KT2440株の組換え体を用いてナフチルアミンの分解試験を行ったが、HPLCでの分析の限りでは、その分解は認められなかった。現在、Acinetobacter sp.BD413株へのクローニングを急いでいる。

This study aims to establish a new breeding method for Pseudomnas putida strains, including the introduction of DNA molecules into various bacteria and the development of cancer-causing bacteria. In 2009, the construction of DNA molecules and the development of genes in Escherichia coli were studied. The results showed that P. putida PpG1064(NAH) was isolated from Escherichia coli. In the second place, the expression of A1 and A2 proteins increased in amplitude, and the expression of A1 and A2 proteins increased in amplitude. In the second place, the expression of A1 and A2 proteins increased in amplitude. In the third place, the expression of A1 and A2 proteins increased in amplitude. In the fourth place, the expression of A1 and A2 proteins increased in amplitude. In the To extract and limit enzyme analysis, to design DNA molecules. In 2010, the company started to conduct research on the decomposition of E. coli, and continued to conduct research on the decomposition of E. coli In consideration of this problem, the DNA molecule of this group was successfully introduced into Pseudomonas and Acinetobacter sp.BD413 strains, Pseudomonas putida KT2440 and Acinetobacter sp.BD413 strains. KT2440 strain was analyzed by HPLC and its components were separated. Acinetobacter sp.BD413 strain is now in the middle of the list.