脳毛細血管内皮細胞が発現する2つの型のエリスロポエチンレセプターの機能解明

阐明脑毛细血管内皮细胞表达的两种促红细胞生成素受体的功能

• 批准号: 09760136
• 负责人: 山地 亮一
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Osaka Prefecture University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09760136/
• 关键词: エリスロポエチン; エリスロポエチンレセプター; 血管内皮細胞; 択一的スプライシング

エリスロポエチン(Epo)は、赤血球前駆細胞の増殖と分化に関与する糖タンパク質と考えられてきたが、申請者は、ラット及びマウス脳毛細血管内皮細胞が、正常型Epoレセプター(Epo-R)mRNA以外に択一的スプライシングによってイントロン5の挿入された異常型Epo-R(I5Epo-R)mRNAを発現していることを見い出した。本研究は異常型であるI5Epo-Rの機能を検討することを目的とした。ラット脳毛細血管内皮細胞から単離したI5Epo-RcDNAを解析したところ、イントロン5の挿入によって、終止コドンがエキソン7にフレームシフトしており、その翻訳産物が、細胞外ドメインと正常とは異なる71アミノ酸残基から成ると推測された。一方、既知のマウスI5Epo-Rは、イントロン5の配列内に終止コドンがあり、CHO細胞で発現させたとき、細胞外ドメインと正常とは異なる20残基のアミノ酸から成る可溶型レセプターとして細胞外に分泌されることが知られている。そこで、ラットI5Epo-R cDNAを用いて、その組換え体をCHO細胞で発現させた。Epo-RのN末端領域に対するペプチド抗体(Ab/Npeptide)を用いたウエスタンブロット解析は、ラットI5Epo-Rを発現しているクローンでは、培養上清画分ではなく、細胞抽出画分でポジティブなバンドを検出したが、マウスI5Epo-Rを発現するクローン(可溶型のポジティブコントロール)では、培養上清画分と細胞紬出画分の両方で、ポジティブなバンドを検出した。さらに、^<125>I-Epoを用いた結合実験から、マウスI5Epo-Rを発現しているクローンでは^<125>I-Epoの特異的な結合が観察され、また低親和性に分類されるKd=700pMのシングルクラスの結合部居が存在することが判明した。これらの結果から、I5Epo-Rはマウスでは可溶型として、ラットでは膜結合型として発現することが判明した。

Epo mRNA is associated with proliferation and differentiation of erythrocytes, and the expression of an abnormal Epo-R(I5Epo-R)mRNA in capillary endothelial cells other than normal Epo-R mRNA. This paper discusses the function of I5Epo-R. Epo-R cDNA was analyzed from capillary endothelial cells, isolated from normal cells, isolated from normal cells, isolated cells, isolated from normal cells, isolated from normal cells, isolated cells, isolated from normal cells, isolated from normal cells, isolated cells, isolated from normal cells, isolated cells, isolated from normal cells, isolated One side, known to the I5Epo-R, the other side of the 5 sequence, the termination of the protein, CHO cell development, extracellular development, normal, different, 20 residues of the acid, soluble, extracellular secretion, and so on. I5Epo-R cDNA was developed in CHO cells. Epo-R N-terminal domain (Ab/Npeptide) is used to analyze, detect, and detect the I5Epo-R in culture supernatant fractions, cell extract fractions, and the I5Epo-R in culture supernatant fractions.(Soluble type), culture supernatant and cell culture supernatant. In <125>addition, I-Epo binding was detected in the presence of I5Epo-R, and the presence of <125>I-Epo specific binding sites in the presence of Kd=700pM binding sites in the presence of I5Epo-R. The results show that I5Epo-R is soluble and membrane-bound.