新規水・電解質代謝調節因子ウログアニリンの機能解析と病態生理学的意義の解明

新型水/电解质代谢调节剂尿鸟苷蛋白的功能分析及病理生理意义

• 批准号: 09770107
• 负责人: 宮里 幹也
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: National Cardiovascular Center Research Institute
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770107/
• 关键词: ウログアニリン; グアニリン; グアニル酸シクラーゼ; 水・電解質代謝調節

1) uroguanylin遺伝子の構造決定とプロモーター領域の機能解析平成9年度にクローニングに成功したヒトおよびマウスuroguanylin遺伝子は、いづれも約2.5kbの範囲で存在し、guanylin遺伝子と同様に3つのexonから構成されており、mature peptide部分はexon 3に含まれる共通の構造をしていた。得られたプロモーター領域DNAを用いて、ルシフェラーゼ遺伝子をレポーター遺伝子としたベクターを構築した。uroguanylin遺伝子の発現を認める培養腸上皮細胞にトランスフェクトし、uroguanylin遺伝子のプロモーター領域の機能解析を進めている。2) uroguanylin遺伝子破壊マウスによるuroguanylinの機能解析前年度に単離したマウスuroguanylin遺伝子ゲノム断片を用いて、マウスuroguanylin遺伝子のtargeting vectorを構築し、電気穿孔法にてES細胞に遺伝子導入を行い、薬剤選別にて組換え体を得た。サザン解析にて相同組換え体を同定後、キメラマウスを作製し、最終的にuroguanyIin遺伝子破壊マウスによるuroguanylinの機能解析を行う。3) 新規guanylin familyペプチドの同定クローニングに成功したラットuroguanylin cDNAを用いて遺伝子発現を解析した結果、uroguanylin遺伝子は主として腸管に発現していたが、guanylin遺伝子の発現を認めない胃、腎臓,膵臓,肺においてもuroguanylin遺伝子は発現していた。ラット小腸および腎臓のcDNAライブラリーをlow stringencyの条件でスクリーニングし、guanylin familyに属する第三のアイソペプチドをcodeする遺伝子の同定を進めている。4) 循環調節異常、消化器系腫瘍性疾患におけるuroguanylin遺伝子およびその近傍領域の多型解析ヒトuroguanylinとguanylin遺伝子はFISH解析にて第1染色体短腕上に極めて近接して存在(1p34-p35および1p33-p34)し、その近傍には、高い変異性を示す座位が存在することを確認した。今後、各種循環調節異常、消化器系腫瘍性疾患者についてuroguanylinに関連する遺伝子の多型性を解析し、遺伝的素因との関連性を明らかにする。

1) Uroguanylin heritage 伝 son の structure decision と プ ロ モ ー タ ー field analytical pp.47-53 の function 9 year に ク ロ ー ニ ン グ に successful し た ヒ ト お よ び マ ウ ス uroguanylin heritage 伝 は, い づ れ も about 2.5 KB の van 囲 で し, traces of guanylin 伝 son と with others に 3 つ の exon か ら constitute さ れ The てお てお and the mature peptide part of <s:1> exon 3に contain まれる common <s:1> structures を て て た た た た た た. Have ら れ た プ ロ モ ー タ DNA を ー field with い て, ル シ フ ェ ラ ー ゼ heritage 伝 son を レ ポ ー タ ー heritage 伝 son と し た ベ ク タ ー を build し た. Uroguanylin posthumous son 伝 の 発 を now recognize め る に culture of intestinal epithelial cells ト ラ ン ス フ ェ ク ト し, uroguanylin but 伝 の プ ロ モ ー タ ー field analytical を の function into め て い る. 2) uroguanylin heritage 伝 son broken 壊 マ ウ ス に よ る uroguanylin の function before parsing annual に 単 from し た マ ウ ス uroguanylin posthumous son 伝 ゲ ノ ム を fragment with い て, マ ウ ス uroguanylin heritage 伝 son の targeting Vector を constructing し, 気 perforation method に て ES cells に heritage 伝 import line を い, 薬 tonic choose don't に て group in え body を た. サ ザ ン parsing に て in same group を え body with after, キ メ ラ マ ウ ス を に of し, final uroguanyIin heritage 伝 son broken 壊 マ ウ ス に よ る uroguanylin の function analytical う を line. 3) new rules guanylin family ペ プ チ ド の with fixed ク ロ ー ニ ン グ に successful し た ラ ッ ト uroguanylin CDNA を with い て heritage 伝 son 発 now を parsing し た results, uroguanylin but 伝 は main と し て insufflate に 発 now し て い た が, guanylin but 伝 の 発 を now recognize め な い viscera stomach and kidney, Cui viscera and lung に お い て も uroguanylin heritage 伝 son は 発 now し て い た. ラ ッ ト small intestine お よ び renal viscera の cDNA ラ イ ブ ラ リ ー を low stringency の conditions で ス ク リ ー ニ ン グ し, guanylin family に genus す る third の ア イ ソ ペ プ チ ド を code す る heritage 伝 son の with fixed を め て い る. 4) Cycle dysregulation, digesters swollen sores disorder に お け る uroguanylin posthumous son 伝 お よ び そ の nearly alongside domain の polymorphism analytical ヒ ト uroguanylin と guanylin posthumous son 伝 は FISH parsing に て chromosome 1 short wrist に extremely め て nearly meet し て exist (1 p34 p35 お よ び 1 p33 - p34 The を, そ, <s:1> adjacent to に, に, and high <s:1> variability を indicate the existence of す seats が and する とを とを confirm the た. In the future, all kinds of cycle dysregulation, digesters is swollen sores sexual disease patients に つ い て uroguanylin に masato even す る heritage 伝 son の polytypism を parsing し, but 伝 element for と の masato even sex を Ming ら か に す る.

项目成果

Miyazato M.,et al.: "Genomic Structure and Chromosomal Localization of Human Uroguanylin" Genomics. 43・3. 359-364 (1997)

Miyazato M.等：“人类尿鸟苷蛋白的基因组结构和染色体定位”基因组学43・3（1997）。

Nakazato M., et al.: "Tissue distribution, cellular source and structural analysis of rat immunoreactive uroguanylin." Endocrinology. 139・12. 5247-5254 (1998)

Nakazato M. 等人：“大鼠免疫反应性尿鸟苷蛋白的组织分布、细胞来源和结构分析”，139・12（1998 年）。