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骨組織由来腫瘍細胞誘引因子の単離・同定-ラット骨肉腫細胞株を用いて

大鼠骨肉瘤细胞系骨组织源性肿瘤细胞引诱剂的分离与鉴定

基本信息

批准号：
09770157
负责人：
長嶋洋治
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

(背景)腎細胞癌、乳癌、前立腺癌などは骨転移の頻度が高く、末期に耐え難い苦痛を患者に与える。これらの骨高転移性を裏付ける分子機構を解明することは、患者のQuality of lifeの向上のみならず、骨転移の予防にもつながる。(目的)本研究では、骨に由来する腫瘍細胞誘引因子の単離同定を行った。再現性を持って、多量の蛋白を抽出するために、ラット由来骨形成性骨肉腫細胞株YROS-1(Machida,Nagashima et al.,1995)の培養上清を用いた。(方法)YROS-1の無血清培養上清を収集し、腎細胞癌細胞株を用いてのBoyden chamber assayを行い、腫瘍細胞誘引活性を検討した。次に、硫安沈殿、各種カラムを用いた分画化を行い、誘引活性が見られる分画に検討を加えた。Western blottingは型通り行った。(結果)1. YROS-1の培養上清中には、腎細胞癌細胞株YCRに対する誘引活性が存在することがBoyden chamber assayで証明された。あらかじめ培養上清を細胞と混合することにより、同活性は中和された。2. 硫安沈殿及びカラム操作にて、同活性を有する分画には、38kDaの分量を有する蛋白質が含まれていた。文献上、同蛋白質はSPARC/Osteonectin/BM-40と予想され、同蛋白に対する抗体を用いて行ったwestern blottingで反応性が確認された。また、中和抗体の存在下では、腫瘍細胞誘引活性は抑制された。3. YROS-1培養上製の腫瘍紺胞誘引活性は、Boyden chamber膜がIV型コラーゲンにコートされている場合に上昇することが知られた。他の基質蛋白質では影響されなかった。(結論)SPARCはIV型コラーゲンと結合することによって、少なくとも一部の腫瘍細胞に対する誘引活性を示す。この活性は腫瘍における骨高転移性を裏付ける分子機構である可能性がある。

(background) the patients with cellular carcinoma, breast cancer and anterior adenocarcinoma with high degree of bone movement and end-stage tolerance and pain. The molecular mechanism of the disease was explained by the molecular organization that the Quality of life of the patient was elevated, and the bone was moved to prevent the disease. (objective) the origin of bone and bone in this study is to determine the origin of the citation factor. The supernatant of YROS-1 (Machida,Nagashima et al.,1995) was cultured and the supernatant was used. (methods) the supernatant of YROS-1 serum-free culture was collected, and the cell line of cancer cell line was used to induce the activity of tumor cell line. (methods) the supernatant of YROS-1 serum-free culture supernatant was collected, and the cell line of cancer cell line was used to induce activity. In the second class, the caisson hall and all kinds of equipment are used to separate the production line and introduce the activity to see the production line. The Western blotting type is similar to the line line. (results) 1. In the supernatant of YROS-1 culture, there was a significant difference in the inductive activity of YCR cell line YCR cell line. The supernatant was mixed with the supernatant, the cells were mixed, the same activity was neutralized and the supernatant was neutralized. two。 Thioamphenicol and diazepam are used in the operation, the same activity is divided into two parts, and the content of 38kDa is divided into protein and protein. In the literature, the same protein "SPARC/Osteonectin/BM-40" and the same protein "western blotting" were used to confirm the antibody. In the presence of neutralizing and neutralizing antibodies, the inducing activity of antigens and neutralizing antibodies inhibits the activity of antigens. 3. The activity of the cells in YROS-1 culture, the activity of Boyden chamber membrane in type IV, the activity of cell, the activity of cell and the activity of cell. He's got a lot of protein, and he's got a lot of trouble. (methods) the SPARC IV-type diagnostic equipment was combined with the induction activity of the paraffin-embedded system and the control group. The high mobility of the bone is affected by the possibility that the molecular mechanism is not available.