骨組織由来腫瘍細胞誘引因子の単離・同定-ラット骨肉腫細胞株を用いて

大鼠骨肉瘤细胞系骨组织源性肿瘤细胞引诱剂的分离与鉴定

• 批准号: 09770157
• 负责人: 長嶋 洋治
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09770157/
• 关键词: 転移; 骨組織; 骨肉腫; 腎細胞癌; SPARC; Osteonectin; BM-40; 誘引因子; Boyden chamber assay; IV型コラーゲン; 骨芽細胞; BM40; 遊走促進能; 浸潤

(背景)腎細胞癌、乳癌、前立腺癌などは骨転移の頻度が高く、末期に耐え難い苦痛を患者に与える。これらの骨高転移性を裏付ける分子機構を解明することは、患者のQuality of lifeの向上のみならず、骨転移の予防にもつながる。(目的)本研究では、骨に由来する腫瘍細胞誘引因子の単離同定を行った。再現性を持って、多量の蛋白を抽出するために、ラット由来骨形成性骨肉腫細胞株YROS-1(Machida,Nagashima et al.,1995)の培養上清を用いた。(方法)YROS-1の無血清培養上清を収集し、腎細胞癌細胞株を用いてのBoyden chamber assayを行い、腫瘍細胞誘引活性を検討した。次に、硫安沈殿、各種カラムを用いた分画化を行い、誘引活性が見られる分画に検討を加えた。Western blottingは型通り行った。(結果)1. YROS-1の培養上清中には、腎細胞癌細胞株YCRに対する誘引活性が存在することがBoyden chamber assayで証明された。あらかじめ培養上清を細胞と混合することにより、同活性は中和された。2. 硫安沈殿及びカラム操作にて、同活性を有する分画には、38kDaの分量を有する蛋白質が含まれていた。文献上、同蛋白質はSPARC/Osteonectin/BM-40と予想され、同蛋白に対する抗体を用いて行ったwestern blottingで反応性が確認された。また、中和抗体の存在下では、腫瘍細胞誘引活性は抑制された。3. YROS-1培養上製の腫瘍紺胞誘引活性は、Boyden chamber膜がIV型コラーゲンにコートされている場合に上昇することが知られた。他の基質蛋白質では影響されなかった。(結論)SPARCはIV型コラーゲンと結合することによって、少なくとも一部の腫瘍細胞に対する誘引活性を示す。この活性は腫瘍における骨高転移性を裏付ける分子機構である可能性がある。

(background), renal cell carcinoma, adenocarcinoma of the breast, front な ど は bone is planning to move の high frequency が く, late に え difficult に い を pain patients with resistant え る. こ れ ら の bone high planning moves in pay け を る molecular institutions を interpret す る こ と の は, patients Quality of life up の の み な ら ず, bone planning move の to prevent に も つ な が る. (Objective) In this study, で and bone に are derived from する tumor cell inducer factors <s:1> 単 and を respectively った. Reproducibility を holding って, a large amount of <s:1> protein を extraction するために, ラット derived bone formation osteomatous bone tumor cell line YROS-1(Machida,Nagashima et al.,1995) <s:1> culture supernatant を used を た. (Methods) The serum-free culture supernatant of YROS-1 <s:1> を collected the lesion, the renal cell carcinoma cell line を was subjected to た て <s:1> Boyden chamber assayを, and the induced activity of abscess cells was を検 to investigate the lesion た. Time に, sulfur AnShenDian, various カ ラ ム を with い た points draw line を い and decoys active が see ら れ る points draw に を 検 please add え た. Western blotting った is usually performed in the form of った. (Results)1. The する attractant activity of the YROS-1 <s:1> culture supernatant に に and the renal cell carcinoma cell line YCRに against する が exists する する とが とがBoyden chamber assayで demonstrates された. Youdaoplaceholder0 じめ じめ culture supernatant を cells と mix する された とによ とによ された じめ and neutralize された with the same activity. 2. The sulfur AnShenDian and び カ ラ ム operation に て, with active を す る points draw に は, 38 kda の component を have す が る protein contains ま れ て い た. In the literature, with protein は SPARC/Osteonectin/BM - 40 と to think さ れ, with protein に す seaborne を る antibody with い て line っ た western blotting で 応 sex が confirm さ れ た. Youdaoplaceholder0, in the presence of neutralizing antibodies <s:1>, で で, and the inducement activity of abscess cells is また inhibited された. (3) training system の swollen sores on purple YROS - 1 cell decoys active は, Boyden chamber membrane が IV コ ラ ー ゲ ン に コ ー ト さ れ て い る occasions に rise す る こ と が know ら れ た. His <s:1> matrix protein で で affects されな った った. (conclusion) SPARC は IV コ ラ ー ゲ ン と combining す る こ と に よ っ て, less な く と も a の swollen sores cells に す seaborne る decoys active を す. <s:1> active <s:1> abscess における bone height 転 mobility を intracellular ける molecular structure である possibility がある.

项目成果

Koshikawa N,Nagashima Y et al.: "Expression of trypsin by epithelial cells of various tissues,leukocytes and neurons in human and mouse." Am J Pathol. 153. 937-944 (1998)

Koshikawa N，Nagashima Y等人：“人和小鼠的各种组织的上皮细胞、白细胞和神经元表达胰蛋白酶。”

Momiyama N, Nagashima Y, et al.: "Inhibitory effect of matrilysin antisense oligonucleotides on human colon cancer invasion in vitro." Int J Cancer. (in press).

Momiyama N、Nagashima Y 等人：“matrilysin 反义寡核苷酸对体外人类结肠癌侵袭的抑制作用。”

Hidai H, Nagashima Y, et al.: "Bilateral chromophobe renal carcinoma in tuberous sclerosis complex." Int J Urol. 4. 86-89 (1997)

Hidai H、Nagashima Y 等人：“结节性硬化症中的双侧嫌色肾癌”。

Numata M, Nagashima Y, et al.: "Inhibition of inducible NOS prevents LPS-induced acute lung injury in dogs." J Immunol. (in press).

Numata M、Nagashima Y 等人：“抑制诱导型 NOS 可预防 LPS 诱导的狗急性肺损伤。”

Taki A,Nagashima Y.et al.: "Chromophobe renal cell carcinoma.An immunohistochemical study of 21 Japanese cases." Modern Pathol. 12(3)(in press). (1999)

Taki A，Nagashima Y.et al.：“嫌色性肾细胞癌。21 例日本病例的免疫组织化学研究”。