ヒトWilms腫瘍細胞株を用いたWilms腫瘍抑制遺伝子(WT-1)の機能解析

使用人 Wilms 肿瘤细胞系进行 Wilms 肿瘤抑制基因 (WT-1) 的功能分析

• 批准号: 06770165
• 负责人: 長嶋 洋治
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06770165/
• 关键词: Wilms腫瘍; WT-1遺伝子; ヌードマウス移植株; 遺伝子移入

(目的)本研究では、当初、1.無虹彩症患児に発生したWilms腫瘍より樹立したヌードマウス移植腫瘍株KCMC-WT-1よりin vitro培養細胞株を樹立し、性格付けを行う、2.1で樹立された培養細胞株に、Wilms腫瘍抑制遺伝子(候補)WT-1 cDNAを組み込んだ発現プラスミドを移入し、細胞の性格の変化を検討し、WT-1遺伝子の機能解析を行う、ことを目的とした。(方法および結果)1.KCMC-WT-1の継代時毎に(現在継代21代)、培養細胞株を樹立を試みた。しかし、組織片植え込み法、酵素消化法のいずれにおいても、マウス線維芽細胞の増殖により腫瘍細胞の安定した増殖は得られなかった。現在、培養条件を検討中であるが、無血清培地、低カルシウム培地、浸透圧を変化させた培地などを用いた培養を試みている。2.KCMC-WT-1より細胞株の樹立が困難であったため、我々が樹立したラットWilms腫瘍細胞株ENU-T-1(Nagashima et al.,1989; Sumino et al.,1992, Nagashima et al.,1992)をrecipient細胞として用いることを検討した。本細胞株はノザン法にてラットWT-1遺伝子転写産物を欠いており、本実験に適している。 3.WT-1遺伝子の発現プラスミドとしてpCAGGS-neo-WT1(秋山徹博士より供与)を用いENU-T-1に、リポフェクチン法による遺伝子移入を行った。現在、得られたクローンの性格(増殖性変化、ヌードマウス移植性の変化など)を検討している。(付記)KCMC-WT-1は継代中に、組織学的に、器官様成分が失われ、腎芽細胞成分によって構成されるようになった。このことから、細胞株の樹立がより容易になると期待される。

(purpose) this study で は, at the beginning, 1. With no rainbow disease where に 発 raw し た Wilms swollen sores よ り set し た ヌ ー ド マ ウ swollen sores strains KCMC ス transplant - WT - 1 よ り in Vitro culture cell lines を し, character pay け を う, 2.1 で set さ れ た culture cell lines に, Wilms swollen sores suppression heritage 伝 child (alternate) WT - 1 cDNA を group み 込 ん だ 発 now プ ラ ス ミ ド を move し, cell の の personality - the を beg し 検 heritage, WT - 1 伝 の function analytical line を う, こ と を purpose と し た. (method および results)1.KCMC-WT-1 <s:1> 継 generations, each に(now 継 generation 21), culture cell line を establish を test みた. し か し, tissue slice え 込 み method, the enzyme digestion method の い ず れ に お い て も, マ ウ ス line d の raised bud cells reside に よ り swollen sores cells の settle し た raised colonization は must ら れ な か っ た. Now, culture conditions, を 検 beg in で あ る が, serum-free culture, low カ ル シ ウ ム petty, soak 圧 を variations change さ せ た petty な ど を with い た cultivate を try み て い る. 2. The KCMC - WT - 1 よ り cell lines の set が difficult で あ っ た た め, I 々 が set し た ラ ッ ト Wilms swollen sores cell lines emu - T - 1 (Nagashima et al., 1989; Sumino et al.,1992, Nagashima et al.,1992)をrecipient cells と と て て with を る とを検 とを検 for た た. This cell lines は ノ ザ ン method に て ラ ッ ト WT - 1 heritage 伝 child product planning write を owe い て お り, this be 験 に optimum し て い る. 3 WT - 1 heritage 伝 son の 発 now プ ラ ス ミ ド と し て pCAGGS neo - WT1 (akiyama he よ り) and supply を with い emu - T - 1 に, リ ポ フ ェ ク チ ン method に よ る heritage 伝 child into line を っ た. Now, have to ら れ た ク ロ ー ン の character (raised yield variations, ヌ ー ド マ ウ ス portability の variations change な ど) を beg し 検 て い る. (pay) KCMC - WT - 1 は 継 generation in に to others in composition が, histologic に, organs わ れ, bud cells composition に よ っ て constitute さ れ る よ う に な っ た. The establishment of a cell line ら is easy to になると expect される.

项目成果

Nagashima et al.: "Establishment and characterization of a malignant melanoma cell line (YP-MEL) derived from a NCMsis patient." Pathol.Res.Pract.190. 178-185 (1994)

Nagashima 等人：“源自 NCMsis 患者的恶性黑色素瘤细胞系 (YP-MEL) 的建立和表征。”

Nagashima et al.: "Establishment of three rat soft tissue tumor cell lines with different degrees of myogenic differentiation." Pathol.Res.Pract.190. 1071-1076 (1994)

Nagashima 等人：“建立三种具有不同肌源性分化程度的大鼠软组织肿瘤细胞系。”

Macida,Nagashima et al.: "Establishment and characterization of rat osteosarcoma cell lines induced by radioactive phosphorus." Pathol.Res.Pract.(in press).

Macida，Nagashima 等人：“放射性磷诱导的大鼠骨肉瘤细胞系的建立和表征。”

Fukushima,Nagashima et al.: "Chromophobe renal cell carcinoma." Pathol.Int.44. 401-406 (1994)

Fukushima，Nagashima 等人：“嫌色肾细胞癌”。

Miyagi,Nagashima et al.: "Studies for genes expressed in neuroblastomas detected by mass screening." Proc.3rd Int.Symp.Neuroblastoma Screening. 148-151 (1994)

Miyagi，Nagashima 等人：“通过大规模筛选检测到的神经母细胞瘤中表达的基因的研究。”